微生物的实验室培养_(经典版)ppt课件.ppt

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1、第一章微生物培养技术微生物:结构都相当简单，个体多数十分微小，通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构。2、类群1、特点病毒（无细胞结构、寄生生活）细菌电子显微镜下的结核杆菌放线菌真菌青霉菌酵母菌原生生物微生物:1.特点：结构都相当简单,个体多数十分微小.通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构.病毒细菌放线菌真菌原生生物2.微生物的类群无细胞结构原核细胞真核细胞到目前为止，几十项Nobel生理学和医学奖，化学奖都与微生物学有关微生物的分离和纯培养技术是微生物最基本的实验技术，它包括培养基的制备、灭菌和消毒、接种、培养等步骤内容提要：微生

2、物及其分类培养基与各类营养物质无菌技术菌落大肠杆菌的纯化培养微生物数量的测定一、培养基1、概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。按物理状态不同划分固体培养基液体培养基在液体培养基中加入一定量凝固剂，使其成为固体状态，琼脂含量一般为1.5%-2.0%琼脂含量一般为0.2%-0.7%不加任何凝固剂半固体培养基固体培养基常用来进行微生物的分离、鉴定、活菌计数及菌种保藏观察微生物的运动特征、分类鉴定及噬菌体效价滴定大规模工业生产及在实验室进行微生物的基础理论和应用方面的研究2、分类按用途不同划分基础培养基鉴别培养基含有一般微生物生长繁殖所需的基本营养物

3、质的培养基（牛肉膏蛋白胨培养基）用来将某种或某类微生物从混杂的微生物群体中分离出来的培养基用于鉴别不同类型微生物的培养基选择培养基微生物产生某种代谢产物，与培养基中的特殊化学物质发生特定的化学反应，产生明显的特征变化在培养基中加入相应的特殊营养物质或化学物质，抑制不需要的微生物的生长，有利于所需微生物的生长2、分类选择培养基应用加入青霉素加入高浓度食盐不加氮源不加含碳有机物的无碳培养基加入青霉素等抗生素延伸：分离酵母菌、霉菌等真菌分离金黄色葡萄球菌分离固氮菌分离自养型微生物分离导入了目的基因的受体细胞鉴别培养基:加入伊红美蓝琼脂培养基（EMS培养基）鉴别大肠杆菌现象：蓝紫色金属

4、光泽按成分不同划分天然培养基合成培养基化学成分不恒定的天然有机物牛肉膏蛋白胨培养基、麦芽汁培养基。用于工业生产化学成分完全了解的物质配制而成的培养基高氏1号培养基、查氏培养基。用于分类和鉴定2、分类一.培养基：3.基本营养：碳源、氮源、水、无机盐、生长因子（能源）⑴碳源无机碳源：有机碳源：CO2、CO32-、HCO3-牛肉膏、蛋白胨等自养微生物异养微生物⑵氮源无机氮源：有机氮源：NH4＋、NO3-牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等注：含CHON的有机物是异养型微生物的碳源、氮源、能源（3）能源一.培养基：（4）（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）微生物生长不可缺少的微量有机物如：维生素

5、、氨基酸、碱基等生长因子：牛肉膏蛋白胨培养基应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。培养基组分作用琼脂20g牛肉膏5g蛋白胨10gNaCl5gH2O定容至1000ml1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方凝固剂提供碳源、氮源、能源、生长因子碳源、氮源、生长因子、能源无机盐水、溶剂4.培养基要满足微生物对环境条件的需求：真菌微酸性（5.0-6.0）细菌中性（6.5-7.5）放线菌微碱性（7.5-8.5）大多数微生物适宜生长的温度在25-40℃之间厌氧菌需提供无氧条件pH：温度：氧气：（1）灭菌：使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。二.无菌技术：泛指在培养微生物的

6、操作中，防止外来杂菌的污染的方法灼烧灭菌干热灭菌箱高压蒸汽灭菌锅（2）消毒：使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包括芽孢和孢子）煮沸消毒法：100℃5-6min巴氏消毒法：70-75℃30min或80℃15min化学药剂消毒法：酒精、氯气紫外线消毒：实验前30min煮沸消毒法巴氏消毒法化学药剂（70%酒精等）紫外线针对不耐高温的液体接种室、超净工作台能耐高温的，需要保持干燥的物品灼烧法干热灭菌高压蒸汽灭菌接种工具（接种环等）实验操作者的双手培养皿等玻璃器皿培养基消毒方法灭菌方法实验操作者的衣服单个或少数菌体2.特征：大小、形状、光泽度、颜色、透明度等。

7、3.功能：1.定义：三.菌落鉴定菌种的重要依据固体培养基上大量繁殖子细胞群体四、大肠杆菌的分离和纯培养分散成单个细胞,形成单个菌落1、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基（大肠杆菌分离和纯培养）计算、称量（配制固体培养基要加入琼脂）溶化调pH(注意：灭菌前调PH)分装、包扎灭菌（高压蒸汽灭菌）倒平板倒平板技术1234使瓶口迅速通过火焰在火焰旁打开锥形瓶打开一条稍大于瓶口的缝隙，向培养皿中倒入约10-20ml倒入培养皿，立即盖上皿盖。等待平板冷却凝固后倒置1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用