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《液相色谱分析方法建立-系列一基本理论及色谱介绍ppt课件.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、浅谈高效液相色谱法色谱基础篇色谱法的基本原理是利用混合物中各组分物理化学性质的差异（如吸附力、分子形状及大小、分子亲和力、分配系数等），使各组分在两相（一相为固定的，称为固定相；另一相流过固定相，称为流动相）中的分布程度不同，从而使各组分以不同的速度移动而达到分离的目的。基本理论慢中等快色谱分离Temporalcourse淋洗液液相色谱分类分配色谱正相模式(NP-LC)反相模式(RP-LC)反相离子对色谱(IPC)离子交换色谱(IEC)尺寸排阻色谱(GPC/GFC)一、分配色谱——反相模式(RP)C18(ODS)C8(octyl)C4(butyl)苯基TMS氰基-Si
2、-C18H37Si非极性相互作用力是什么?OHOHC18(ODS)强弱疏水性Si疏水性！！！如果样品有CH3CH2CH2---:碳链:芳香基如果样品有-COOH:羧基-NH2:氨基-OH:羟基作用力强作用力弱反相模式下流动相的选择优化水相（缓冲液）和有机相的比例非常重要甲醇，乙腈和THF是常用的有机溶剂在有缓冲液的情况下,缓冲液的浓度和pH值非常重要增加流动相极性20%H2O30%H2O40%H2O1:对羟基苯甲酸甲酯2:对羟基苯甲酸乙酯3:对羟基苯甲酸丙酯4:对羟基苯甲酸丁酯有机相:MeOH固定相极性变化对分离的影响C18(ODS)强样品SiC8样品一般Si样品C4
3、弱Si分析条件柱:Shim-packCLC-ODS流动相:MeOH:H2O=7:3流速:1.0mL/min温度:40C进样体积:10uL检测器:UV-254nm峰1.苯甲酸甲脂2.苯甲酸乙脂3.n-苯甲酸丙酯4.n-苯甲酸丁酯ODSC8TMS固定相极性变化对分离的影响离子对试剂阴离子化合物氢氧化四丁基铵溴化四丁基铵阳离子化合物丁烷基磺酸钠(C4)戊烷基磺酸钠(C5)己烷基磺酸钠(C6)庚烷基磺酸钠(C7)辛烷基磺酸钠(C8)癸烷基磺酸钠(C10)十二烷基磺酸钠(SDS)2、离子对色谱离子对色谱影响因素离子对试剂的类型离子对试剂的浓度流动相的pH3、正相色谱硅胶柱:常用
4、氰基柱:常用氨基柱:分析糖二醇基柱:分析蛋白质硅胶SiSi-Si-CH2CH2CH2CN-Si-CH2CH2CH2NH2-Si-CH2CH2CH2OCH(OH)-CH2(OH)化学键合相相互作用力是什么?OHHOSiOHSiOH强弱非常弱氢键力氢键力！！！如果样品有-COOH:羧基-NH2:氨基-OH:羟基氢键力强。如果样品没有任何官能团，象碳水化合物如果样品有大的基团,由于空间障碍氢键力弱。正相模式下流动相的选择主要试剂烷烃(戊烷,己烷,庚烷,辛烷)芳香烃(苯,甲苯,二甲苯)二氯甲烷氯仿四氯化碳辅助试剂甲基-t-丁基醚(MTBE),乙醚,四氢呋喃(THF),二氧杂环
5、乙烷,嘧啶,乙酸乙酯,乙腈,丙酮,异丙醇,乙醇,甲醇为了调整保留时间，可以选择主要试剂然后再加入辅助试剂。增加流动相极性0%MeOH2%MeOH5%/MeOH1:邻苯二甲酸二辛酯2:邻苯二甲酸二丁酯3:邻苯二甲酸二乙酯4:邻苯二甲酸二甲酯主要试剂:己烷反相色谱流动相极性大于固定相极性能溶于水/有机混合物的中性或非离子化合物正相色谱流动相极性小于固定相极性不溶于水/有机混合液的亲脂样品、异构体混合物和制备HPLC反相色谱与正相色谱的对比二、离子交换色谱N+RRR样品SO3-样品+++++++++++++离子吸引力离子交换色谱应用生物领域(蛋白质,农药,氨基酸分析)离子分
6、析阳离子交换剂强阳离子交换剂(SCX)(R-SO3-)弱阳离子交换剂(WCX)(R-COO-)阴离子交换剂强阴离子交换剂(SAX)(R4N+)弱阴离子交换剂(WAX)(DEAE)体积排除色谱的分离机理小分子可以扩散到凝胶空隙，由其中通过，出峰最慢；中等分子只能通过部分凝胶空隙，中速通过；大分子被排斥在外，出峰最快；溶剂分子小，故在最后出峰。分子筛效应三、尺寸排阻色谱法（SEC）流出顺序完整的液相色谱方法流动相类型色谱柱及柱温流速检测器进样量运行程序梯度方法等度方法检测器篇1、紫外可见吸收检测器(UV)2、光电二极管阵列检测器(PDA)3、荧光检测器(FD)4、示差折光
7、检测器(RID)5、电化学检测器(ED)6、化学发光检测器(CD)7、蒸发光散射检测器(ELSD)其它检测器质谱检测器激光检测器红外检测器柱后反应检测器介电常数检测器放射性同位素检测器离子选择电极检测器旋光检测器圆二色谱检测器等等原理：基于被分析组分对特定波长紫外光的选择性吸收定量基础：朗伯-比耳定律，A＝kCL优点：1）灵敏度高2）对温度和流速不敏感3）可用于梯度洗脱缺点：仅适用于测定有紫外吸收的物质紫外检测器光电二极管矩阵检测器（PDA）一种三维水平的吸光度检测器--采集三维谱图兼顾紫外检测器及可见分光光度计的信息在收集色谱图的同时，得到光谱图提
