食品安全国家标准 婴幼儿食品胆碱的测定_标准文档.pdf

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1、中华人民共和国国家标准GBxxxx-xxxx食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定（征求意见稿）食品安全国家标准公开征求意见xxxx-xx-xx发布xxxx-xx-xx实施GBxxxx—xxxx前言本标准代替GB5413.20-2013《食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定》。本标准与GB5413.20-2013相比，主要变化如下：——删除第二法雷氏盐分光光度法，增加了离子色谱法作为第二法；——增加了液相色谱-串联质谱法作为第三法。食品安全国家标准公开征求意见IGBxxxx—xxxx食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定1范围本标准规定了婴幼儿食品和乳品中

2、胆碱的测定方法。本标准适用于婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定，第一法酶比色法，第二法离子色谱法，第三法液相色谱-串联质谱法。第一法酶比色法2原理试样中的胆碱经酸水解后变成游离态的胆碱，再经酶催化后与显色剂反应生成有色物质，其颜色的深浅在一定浓度范围内与胆碱含量成正比。3试剂和材料除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的三级水。3.1试剂3.1.1三羟甲基氨基甲烷[(CH2OH)3CNH2]。3.1.2苯酚（C6H5OH）。3.1.3浓盐酸（HCl）。3.1.4氢氧化钠（NaOH）。3.1.5胆碱氧化酶：≥10units/mg食品安全国家标准公开征求意见，

3、置于-20℃保存。3.1.6过氧化物酶：≥250units/mg，置于2℃~8℃保存。3.1.74-氨基安替比林（C11H13N3O）。3.1.8磷脂酶D：≥60units/mg，置于-20℃保存。3.2试剂配制3.2.1盐酸溶液（1mol/L）：量取85mL浓盐酸注入约900mL水中，再定容至1000mL。3.2.2盐酸溶液（3mol/L）：量取255mL浓盐酸注入约600mL水中，再定容至1000mL。3.2.3三羟甲基氨基甲烷缓冲溶液（Tris）（0.05mol/L）：pH=8.0±0.2。准确称取6.057g三羟甲基氨基甲烷溶于500mL水中，用盐酸溶液（1mol/L

4、）调pH至8.0±0.2，再用水定容至1000mL。此溶液在4℃冰箱中可保存一个月。3.2.4用于酶反应的显色剂：取100~120活力单位的胆碱氧化酶、250~280活力单位的过氧化物酶、75个~100个活力单位的磷脂酶D、15mg4-氨基安替比林和50mg苯酚置于100mL的容量瓶中，用0.05mol/LTris缓冲溶液溶解并定容至刻度。临用现配。3.2.5氢氧化钠溶液（500g/L）：称取500g氢氧化钠，溶于水并定容至1000mL。3.3标准品1GBxxxx—xxxx酒石酸氢胆碱标准品（C9H19NO7），CAS号：87-67-2，纯度≥99%，或经国家认证并授予标准物

5、质证书的标准物质。3.4标准溶液配制3.4.1胆碱（以胆碱氢氧化物计，下同）标准储备溶液（2500mg/L）：准确称取在102℃±2℃烘至恒重的酒石酸氢胆碱0.523g（精确至0.1mg），用水溶解并转移至100mL容量瓶中定容至刻度，混匀。4℃避光保存，保存期三个月。3.4.2胆碱标准工作溶液（250mg/L）：吸取10.0mL胆碱标准储备溶液于100mL容量瓶中，用水定容至刻度，4℃避光保存，保存期一个月。3.5材料3.5.10.45μm水性滤膜针头滤器。3.5.2注射器：5mL或相当者。4仪器和设备4.1天平：感量为0.1mg和0.01g。4.2恒温水浴装置：温度可控制

6、在70℃±2℃和37℃±2℃。4.3pH计：精度0.01。4.4分光光度计。5分析步骤5.1样品前处理5.1.1液态试样称取20g（精确至0.01g）混合均匀的试样，置于100mL锥形瓶中，加入10mL盐酸溶液（3mol/L）。5.1.2半固态和固态试样称取5g（精确至0.01g）混合均匀的试样，置于100mL锥形瓶中，加入30mL盐酸溶液（1mol/L），加塞混匀。食品安全国家标准公开征求意见5.1.3水解将装有试样的容器放在70℃±2℃水浴中，水解3h（每隔30min振摇一次），冷却。用氢氧化钠溶液（500g/L）调pH至3.5～4.0，转入50mL容量瓶中，用水定容至刻

7、度。5.1.4过滤用滤纸过滤水解液，滤液应是澄清的，否则，用0.45μm水性滤膜针头滤器再次过滤。滤液放在4℃的冰箱中待用。5.2测定5.2.1标准曲线的制作分别吸取2mL、4mL、6mL、8mL胆碱标准工作溶液于10mL的容量瓶中，用水定容至刻度，配置成浓度分别为50mg/L、100mg/L、150mg/L、200mg/L的系列标准工作溶液，编号为稀释度1、稀释度2、稀释度3、稀释度4和胆碱标准工作溶液（250mg/L）。准备6支试管，一个试管用作试剂空白（A），加入0.100mL水，另五支试管由1至