第一节 免疫标记技术的基本概念ppt课件.ppt

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1、免疫标记技术1感谢你的观看2109年5月18日第一节免疫标记技术的基本概念一、免疫标记与标记免疫的概念二、常用的免疫标记物质2感谢你的观看2109年5月18日免疫标记与标记免疫免疫标记技术：标记物与免疫活性物质的联接技术标记免疫技术：以标记免疫物质检测相应靶物质的技术3感谢你的观看2109年5月18日常用的免疫标记物质类别标记物用途荧光素FITC、RB200、TRITC免疫组化镧系元素螯合物免疫分析测定放射性核素3H、14C、32P、57Gr免疫分析测定125I、131I酶HRP、AP免疫组化免疫分析测定化学发光物Lumino

2、l、lucigenin免疫分析测定金属颗粒胶体金、铁蛋白免疫组化免疫分析测定4感谢你的观看2109年5月18日第二节酶标记技术一、常用标记方法二、标记免疫物的分离与鉴定5感谢你的观看2109年5月18日常用标记方法1、常用酶辣根过氧化物酶（HRP）碱性磷酸酶（AP）2、标记方法戊二醛交联法过碘酸盐氧化法6感谢你的观看2109年5月18日戊二醛交联法(一步法）抗体-NH2+COH-（CH2）3-COH+NH2-酶抗体-NH2=CH-（CH2）3-CH=NH2-酶抗体-NH2=CH-（CH2）3-CH=NH2-抗体酶-NH2=CH

3、-（CH2）3-CH=NH2-酶7感谢你的观看2109年5月18日戊二醛交联法（二步法）COH-（CH2）3-COH+NH2-酶抗体-NH2+CHO-（CH2）3-CH=NH2-酶抗体-NH2=CH-（CH2）3-CH=NH2-酶8感谢你的观看2109年5月18日过碘酸盐氧化法OOOOOONaIO4OOOHOOOHOH+NH2抗体OOONN抗体抗体H2ON抗体NaBH4Schiff碱酶-五炭糖环9感谢你的观看2109年5月18日标记免疫物的分离与鉴定1、分离目的：去除游离酶方法：盐析、柱层析2、鉴定抗体活性酶活性标记物纯度10

4、感谢你的观看2109年5月18日第三节荧光标记技术一、常用标记方法二、标记免疫物的分离与纯化11感谢你的观看2109年5月18日常用标记方法1、荧光素的概念2、生物标记荧光素的要求3、常用荧光素标记原理与方法12感谢你的观看2109年5月18日生物标记荧光素的要求1、具有与蛋白质共价结合的能力2、荧光效率高3、能与背景物质形成鲜明对比4、不影响蛋白质的生物、免疫活性5、标记方法安全、简便6、标记物稳定，易保存13感谢你的观看2109年5月18日FITC的标记原理与方法荧光素-N=C=S+NH2-抗体荧光素-N-C-N-抗体HS

5、H14感谢你的观看2109年5月18日RB200的标记原理与方法荧光素-SO3Na+PCl5荧光素-SO2Cl+PCl3+NaCl荧光素-SO2Cl+NH2-抗体荧光素-SO2-NH-抗体+HCl15感谢你的观看2109年5月18日标记免疫物的分离与鉴定1、分离目的：去除游离荧光素方法：柱层析2、鉴定抗体活性标记物结合度F/P比值的应用意义16感谢你的观看2109年5月18日第四节放射性核素标记技术一、常用标记方法二、标记免疫物的分离与纯化17感谢你的观看2109年5月18日常用标记方法1、常用放射性核素2、125I的标记方法

6、直接法（氯胺T法）间接法（连接法）18感谢你的观看2109年5月18日直接法（氯胺T法）OH-NHCHONH-CH2OH-NHCHONH-CH2Na125I4。C125I氯胺T19感谢你的观看2109年5月18日间接法（连接法）CH2OHOH-C-C-O-N-C-CH2HOO=C-C-CH2CH2OHOH-C-C-O-N-C-CH2HOO=C-C-CH2+Na125I氯胺T125INSHPP20感谢你的观看2109年5月18日间接法（连接法）CH2OHOH-C-C-O-N-C-CH2HOO=C-C-CH2CH2OHH-C-C-

7、N-蛋白质HOH+NH2-蛋白质125I125I21感谢你的观看2109年5月18日标记免疫物的分离与鉴定1、分离目的：去除游离放射性核素方法：柱层析2、鉴定游离放射性核素含量免疫活性比放射性（mCi/mg）应用意义22感谢你的观看2109年5月18日本章小结1、免疫标记技术的概念2、常用免疫标记物质及其标记方法3、标记免疫物质的分离与鉴定23感谢你的观看2109年5月18日思考题1、何谓免疫标记技术？2、常用的免疫标记物质有哪些？3、酶标记的主要方法有哪些？4、F/P比值的实用意义如何？5、何谓比放射性？有何意义？24感谢你

8、的观看2109年5月18日标记免疫技术的应用25感谢你的观看2109年5月18日第一节标记免疫技术的分类一、按指示标记物质划分的类型二、按测定方式划分的类型三、按测定用途划分的类型26感谢你的观看2109年5月18日1、酶免疫技术2、荧光免疫技术3、放射免疫技术4、发光免疫技