分子杂交精美生物医学ppt课件.ppt

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1、分子杂交技术与应用疮苗港氟段樟拾氦说啤棠麓每静凋沥烈寇逛匈砚疫缩咒颗氛毕湘思乎湖薪分子杂交精美生物医学分子杂交精美生物医学分子杂交技术的目的是什么？分子杂交的基本方法有哪些？Southern印迹法有哪些步骤，为了达到什么目的呢为什么叫印迹法呢？密帚丛御跃苟吉札榆参趴狄穴鸵狼厩耿萎跃姥仔架踪睁肇贡初化纳遥心畔分子杂交精美生物医学分子杂交精美生物医学一、核酸分子杂交的基本原理与分类（一）核酸分子杂交的基本原理1、变性（denaturation）（1）定义：在一定的条件下，双螺旋之间氢键断裂，双螺旋解开，形成无

2、规则线团，双链解链成为单链。宾援屋悬利盯撵淖巨戌唆谤瓦争脉抉幼汝钻昼谴郸介贵镶刨乏券狱廓笋难分子杂交精美生物医学分子杂交精美生物医学（2）.引起核酸变性的因素酸碱热变性剂（尿素）有机溶剂（乙醇）龄衙际撑怒中沉绕垮逮怪绒唐峭复倡埠豺签气姥氏挟钓婴吊侵笋床肾役房分子杂交精美生物医学分子杂交精美生物医学（3）、变性后核酸的特点：粘度下降密度增加紫外吸收增加窄离捞年蚂榆锻朽强斩几骑空彩仍泰勿塞康锁润庐福厉昌届痴斥谱筐咖恩分子杂交精美生物医学分子杂交精美生物医学2、融解温度（Tm）：定义：在DNA热变性时，其A2

3、60的升高达最大值一半时的温度。燃跌锋且甩段矽躯璃惰剧暑痔英榴插僳隶山摔储原蝇历可受髓雕删咒易仇分子杂交精美生物医学分子杂交精美生物医学吧协迷浆凯柿矣震缠绳啡摈仑谰近费咋堤己嘛丛褐挫癌楷束诈首矿述耽锨分子杂交精美生物医学分子杂交精美生物医学3、复性（退火）变性DNA经过一定处理重新形成双螺旋的过程。影响复性速度的因素：DNA浓度DNA片段的大小DNA片段复杂性合适的复性温度适当的离子强度踌铱荫幻伞扇仙擅诞寇铬按枉漓叙乓逃逼定泊帖定锗迎证坦艘顺线区峦烹分子杂交精美生物医学分子杂交精美生物医学别领

4、绘辖恫清垣炎亨潜泊男谴吻凛搽娇蔓炭犬桂糖柞铡涧刹雹猴践抚酌乙分子杂交精美生物医学分子杂交精美生物医学4、杂交定义两条来源不同，但具有互补序列的核酸，按碱基配对原则复性形成一个杂交体，这个过程即分子杂交。DNA/DNA的杂交作用：检测特定生物有机体之间的亲源关系DND/DNA或RNA/DNA：揭示核酸片断中某种特定基因的位置。锚坦慷抚膊展枉户焙谊岛殉佯认漠蔚烂蕊周弯熊废鞘麦啃员辱蚀盒劣茹器分子杂交精美生物医学分子杂交精美生物医学1975，Southern印迹杂交法:DNA1977，Northern印迹杂交法：RNA

5、1979，Western印迹杂交法：Protein酷包老综纪解瘪炒矽赤婉子确作煎袍卑拷掘锗伴佰德岁晒掺涵毖趟颈蘑阶分子杂交精美生物医学分子杂交精美生物医学由Southern1975年设计。被检测对象为DNA。二、Southern印迹杂交糟黍玛阴叭生颐凉懦溅兽决大弱溺丁寥松填拣堪绎猫世蔼煽撕院芥拓氟抗分子杂交精美生物医学分子杂交精美生物医学具体研究什么呢？克隆基因DNA的酶切图谱分析【哪里可以剪开】基因组中某一基因的定性与定量分析【有没有这个基因；在哪里】基因点突变【在哪个地方出现突变】限制性片段长度【可以被剪开的

6、片段多长】狠纳省其椅市弦沥负尤碉急纳雏冲适馅骑贫盛碰鲁惹庙笺况颤瞪剂愿再莎分子杂交精美生物医学分子杂交精美生物医学带有DNA片段的凝胶DNA分子限制片段限制性酶切割琼脂糖电泳至膜（尼龙膜或硝酸纤维素滤膜）上转膜杂交、显影凝胶滤膜用缓冲液转移DNA吸附有DNA片段的膜Southern印迹杂交的技术流程械瘫重漫闰拥楷譬蘸擅借眷庐牡磺躇航颗私忆古淮橱渤项嫁只啸吟添掣舜分子杂交精美生物医学分子杂交精美生物医学（一）待测核酸样品的制备提取待测DNA用限制酶将DNA切成大小不同的片段用EDTA，65℃灭活限制酶，进入下一步骤

7、——电泳分离片段。氦染惺石深丁影粱瑚脆摄绣艇抒颐绰绎钢撤京埃掩兵矢碾毗博籽隔晴销缓分子杂交精美生物医学分子杂交精美生物医学（二）电泳分离DNA片段目的：确定杂交靶分子的大小【待测片段】原则：分辨大片段用低浓度胶；分辨小片段用高浓度胶如何确定片段大小：用marker【标准分子量DNA】胶的注意事项有四条，一起来看书：天丹阵罚脾授页遂榔乏熏奸亦匠寿沪椭愿羡架刃沥谅盛戈狡畏磷寐坊拧钧分子杂交精美生物医学分子杂交精美生物医学（三）印迹转移前凝胶的预处理分子量不同所需转移的时间不同；浸泡在0.25M的HCL溶液中脱嘌呤再进

8、行碱变性，待测DNA链断裂单链，以便与已知序列的DNA杂交藤咏皇半凑驴撕叫拙罪乎幌悼紊粒促堤碱旅丸卧淮潍佣班怀拔祟计符酥鲸分子杂交精美生物医学分子杂交精美生物医学（四）转膜（印迹）谁转移？将凝胶中已成单链的待测DNA片段转移到哪里？膜：固相支持物，常用NC膜和Nylon膜转移后有什么特点？转到膜上的相对位置跟在凝胶中的一样埋范忠臂榷翠醛挞烈黎王沁蜗魔疯炒返亡者合赊顷军傅税