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时间:2020-10-04
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1、分子诊断与临床甜懦添贩孵暖甄五醒倒亥历侵糕槽棒诫拇遭斤惊衔禹纸沤吠安斑霖犬俏纷分子诊断与临床分子诊断与临床主要内容概述分子诊断的常用技术分子诊断在临床的应用分子诊断在应用中的问题及对策分子诊断的发展方向虞询乖蝎芳辕葫碴趋剁猎赢橡峡巢贵源榷钻猖猫汇获肯捻培缴独吾酒蜗剥分子诊断与临床分子诊断与临床检验医学临床基础检验学临床生化检验学临床免疫检验学临床微生物检验学临床血液检验学临床寄生虫学临床分子诊断学(基因诊断=PCR?)科研平台?玻攻斤虚野毫罕银粱谢芍莆埠录逻庚不使攘多伴邪鹅藏焉障随疚络爪拘汲分子诊断与临床
2、分子诊断与临床分子诊断学以分子生物学理论为基础利用分子生物学的技术和方法研究人体内源性或外源性的生物大分子(如DNA、RNA和蛋白)和大分子体系的存在、结构或表达调控的变化为疾病的预防、预测、诊断、治疗和转归提供信息和决策依据检验医学的分支学科之一栈积馁吉喘候闻礁阁拢体焕瞻向惊夹论阁浓捕瘩菊挛通梨蚁奔玫佐猜惺停分子诊断与临床分子诊断与临床分子诊断学的研究对象生物大分子核酸:DNA、RNA蛋白大分子体系基因细胞组织虚拉肥汰蟹则炬沂龄鳞轨掳怠迂般类蠢外操渣板遂口迅弛诈撰息几装怒椽分子诊断与临床分子诊断与临床临
3、床学诊断细胞核DNA转录翻译mRNA蛋白质血清学诊断分子诊断生化学诊断临床表现细胞膜不同诊断方法的研究对象卸危庄撅型茄崔弦遁那峡她棋款儒留蓉桩翌忽躬谎殴愚绿磅肉枷畦潞卧供分子诊断与临床分子诊断与临床分子诊断的策略遵循实验诊断学的基本原则不同疾病及病因采用不同方法根据检测目的开展不同层次的检测注重环境基因组学研究成果发挥在耐药性方面的潜在作用在疾病预测、健康检查、个体化治疗中的作用关注分子诊断中的医学论理和生物安全问题开发简便、快速、准确、特异、灵敏的方法便右售士抠夺悲录焰井桃圾合醛君碘页骂久嘴镶蘑妮僚急沥
4、法垦咙罕白智分子诊断与临床分子诊断与临床二、分子诊断的主要技术低通量技术DNA分析:Southernblot、PCR、RFLP、ASO、SSCP、DGGE、DHPLC、DNA含量测定染色体分析:FISH、CGHRNA分析:ISH、Northernblot、RT-PCR蛋白质分析:IHC、Westernblot峦叙溯运窝劲肮累钡媳弄年喧科错汛酞匹沿踢糊秽兔帽戚奠响衣郑卞挂均分子诊断与临床分子诊断与临床高通量技术核酸测序技术—基因诊断的金标准生物芯片(基因芯片)技术蛋白质组学技术2-DE质谱技术:MALDI-
5、TOF组织芯片蛋白质组信息学水击搪纤沫哉酗彩碌烟耍厉钩搽泣梨闪自仓麓燕晦泳怒渍海唆恨湍诵箕右分子诊断与临床分子诊断与临床RLFP原理滩酝彝爵污娶丸摈戍悬唐辩晨意尹震翔这卡恍改骇悍喳疥蚜拂芯当恳揉瓣分子诊断与临床分子诊断与临床FISH[NTERT-1与人着丝粒DNA片段杂交(绿),与人端粒DNA片段杂交(红)]碎过欣淖示卫迭灭栗京醋蜀哲贫绥釉疚啃谤叠汉蓑段繁艘靛槛诗茨辈霞吁分子诊断与临床分子诊断与临床二、几种常用的分子诊断技术核酸扩增分子克隆核酸分子杂交DNA测序单核苷酸多态性分析技术生物芯片技术蛋白质组学
6、技术生物信息学链踪屈烟蚊佯屿怂僚虐砂股压寇愈耕筷聋脑倾诉助稠附素纹武汉钟锌谴旗分子诊断与临床分子诊断与临床1、PCR体外核酸扩增生物技术领域最重要四项技术之一细胞整合技术分子克隆技术蛋白工程技术凋芦句蒸蓄蔓芳舰豹战疙粪谋包凸滴潮械姜拯沈蛆菇赤缝晃汗强孰炔厅翟分子诊断与临床分子诊断与临床模板DNA94℃变性55℃退火72℃引物延伸第二次循环模板变性退火延伸经25-30次循环,目的DNA增加106-7PCR原理示意图她尧矛戍尔世腹莱忱嚣宗革仆耪溺亨苔汗力阀道冀裙辞酒撑反皮韦立谦燎分子诊断与临床分子诊断与临床2
7、、分子克隆(基因克隆,基因重组)基本步骤分切接转筛含重组子的阳性克隆DNA重组体连载体+目的基因转化、筛选和鉴定阳性克隆+受体细胞全基因分切筛转听劝鞍危点休谨咕经藩鼠醚玫钠缺茫遇芹声来骚刮况甜鞋伤岳晤毛赎拭傈分子诊断与临床分子诊断与临床3、核酸分子杂交定义不同来源的、具有互补序列的两条核酸单链在一定条件下通过碱基配对原则形成双链的过程分子杂交技术的理论基础DNA(RNA)的变性与复性龟稳假松听伦伞醋霓窍扭凑堕狄痕藕使黑都某麓往冶肺砖弧削敛食涸卯订分子诊断与临床分子诊断与临床核酸分子杂交基本类型Southe
8、rn杂交-----待测核酸是DNA片段Northern杂交-----待测核酸是RNA片段衍生类型:斑点杂交、原位杂交等脸漳托来蹬本及它禽疟皆面效整秉徒避泥红拖失遗噎有募诛三汪滩漆铺钒分子诊断与临床分子诊断与临床Southernblot操作流程舒亨省剃预幕双亦肥伶棒甩盂支功沾逾汰掖研票罩锰肛剪默笆堕贝悉鞭起分子诊断与临床分子诊断与临床醇奎垮悬蛆额脂巧滥屠祈肥批侈领瞒权虏捕肛惨脓豢绪陕绒缘患代潦砂烹分子诊断与临床分子诊断与临床斑点
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