实验二十二--胡萝卜素的柱层析分离.doc

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1、实验二十二胡萝卜素的柱层析分离【目的】1、掌握层析法的基本原理2、了解柱层析分离法在生物化学中的应用【原理】胡萝卜素存在于辣椒和胡萝卜等植物中，因其在动物体内变成维生素A故又称维生素A原，胡萝卜素可用酒精、石油醚和丙酮等有机溶剂从食物中提取出来，且能被氧化铝(A12O3)所吸附。由于胡萝卜素与其他植物色素的化学结构不同，它们被氧化铝吸附的强度以及在有机溶剂中的溶解度都不相同，故将提取液用氧化铝（固定相）吸附，再用石油醚（流动相）等冲洗层析柱，即可分离成不同的色带。同溶质的其它色素比较，胡萝卜素吸附最差，跑在最前面，故也最先被洗脱下去，且可分成两种胡萝卜素（α-胡萝卜素

2、、β-胡萝卜素）【器材】研钵、分液漏斗、层析管等。【试剂】1、95%乙醇2、石油醚3、1%丙酮-石油醚4、氧化铝（Al2O3）5、无水硫酸钠【操作】1、提取取烘干的红辣椒皮3~4个，剪碎后放入研钵中，加95%乙醇4ml，研磨至提取液成深红色，在加石油醚6ml研磨3~5分钟，研磨中可酌情再加石油醚10ml左右。用纱布将提取液直接滤入分液漏斗中，用30ml蒸馏水洗涤三次，直至水层透明为止（为除去提取液中的乙醇）。将红色的石油醚倒入干燥的试管中，加入少量无水硫酸钠除去水分，用软木塞塞紧以免石油醚挥发。2、层析柱的准备将玻璃层析管（底部有过滤垫），装入氧化铝（Al2O3）粉末

3、约10cm高度，于其上铺一张圆形的小滤纸。将管垂直夹在铁夹上备用。3、层析用滴管吸取约2ml石油醚，沿管壁加入层析柱，当层析柱上端石油醚即将但尚未完全浸入氧化铝时，即用滴管吸取石油醚提取液1.0ml沿管壁加入层析柱。待提取液全部浸入层析柱，立即加入含1%丙酮的石油醚冲洗，使吸附在柱上端的物质逐渐展开成为数条颜色不同的色带。【结果及分析】观察色带的位置、宽度与颜色深浅，尤其注意两条胡萝卜素的色带。【注意事项】1、研磨红辣椒皮要快而充分。2、石油醚提取液中的乙醇必须洗净，否则吸附不好，色素的色带弥散不清。3、装柱要均匀、无断层、柱表面要水平（边装柱边振动）。4、辣椒皮、层

4、析柱、研钵、带塞试管应充分干燥5、氧化铝（Al2O3）应充分干燥6、同一组两个同学注意分工合作7、在加入洗脱液时应沿管壁均匀加入，使层析结果平直。8、滤纸片大小应合适。【思考题】1、本实验中的固定相和流动相各是什么？2、层析时能否用水冲洗，为什么？