胡萝卜素的柱层析实验报告

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1、为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划胡萝卜素的柱层析实验报告　　柱层析分离色素　　一、【实验目的】　　1．了解柱层析的分类，掌握各种柱层析的原理。　　2．熟练掌握吸附层析的原理和操作技术。　　二、【实验原理】　　叶绿体色素是植物吸收太阳光能进行光合作用的重要物质，主要有叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素组成。从植物叶片中提取和分离叶绿体色素是对其认识和了解的前提。利用叶绿体色素能溶于有机溶剂的特性，可用95%乙醇或无水乙醇提

2、取。目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　分离色素的方法有多种，如纸层析、柱层析等。柱层析法是色谱法中的一种，它是根据混合物中各组分对固定相的吸附能力，以及对洗脱剂的溶解度不同将各组分分离。常用的柱色谱有吸附色柱谱和分配柱色谱两类。吸附柱色谱通常是在玻璃管中填入表面积很大，经过活化的多孔性物质或粉状固

3、体作为吸附剂，当混合物的溶液流经吸附柱时，就被吸附在柱的上端，然后从柱顶加入溶剂洗脱。由于不同化合物在吸附柱上的吸附能力不同，在同一溶剂中的溶解度也不同，因此各组分随溶剂以不同速度下移，形成色带。继续用溶剂洗脱，吸附能力最弱的组分就随溶剂首先流出，整个层析过程进行反复的吸附-解析-再吸附-再解吸。用柱层析法可以分别收集各组分，并逐个鉴定。　　本实验是把三氧化二铝填入玻璃管中作为吸附剂，将叶绿体色素的石油醚提取液倾于吸附柱上，色素即被吸附。由于色素的种类不同，被吸附的强弱不同，就在吸附柱上排列成为不同的

4、色层，再利用吸附剂在不同溶剂中有不同的吸附力，用不同的溶剂进行洗脱，从而达到叶绿体主要的4种色素的分离。　　三、【实验材料】　　原料：　　新鲜的菠菜叶　　试剂：　　1．无水乙醇或95%乙醇5.三氧化二铝　　2．石英砂6．饱和氯化钠溶液　　3．丙酮7.水硫酸钠　　4．石油醚8洗脱液：丙酮：石油醚＝1：9器材：　　层析柱，研钵，蒸馏装置，　　脱脂棉，天平，烧杯，过滤漏斗，　　玻璃棒，锥形瓶，分液漏斗，试管，　　铁架台　　四、【实验操作】　　1．色素的提取：目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受

5、到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　20克菠菜，加少许石英砂，再加20毫升无水乙醇研磨成浆，脱脂棉过滤，保存滤液，滤渣再用无水乙醇提取一次，合并滤液，滤渣再加入30毫升石油醚提取一次，过滤，合并滤液，转移至分液漏斗中,再加入40毫升饱和氯化钠溶液震荡，弃去下层溶液，再分别加入20毫升水震荡洗涤几次，直至下层无色，保留上层溶液，转移至三角瓶中，加入无

6、水硫酸钠干燥5分钟，备用.　　2．样品的浓缩：　　将提取液放入蒸馏烧瓶中，蒸除多余的石油醚，至剩余液体5-8毫　　升左右，以备加样使用。　　3．层析拄的制备：　　15克碱性三氧化二铝加入30毫升石油醚搅拌，浸泡10min.。在层　　析拄内加入一团棉花在底部，再加入石英砂以上，然后用石油醚半充满柱子，再将浸泡好的三氧化二铝倒入柱内，倒时应该缓慢，重复使用下面的石油醚，直到装完。用石油醚洗柱内壁，顶部加一小团棉花，然后再填入石英砂厘米高。　　3．样品的分离层析：吸附层析分离色素　　打开层析拄下部开关，向拄

7、内加入2毫升浓缩液，至液体没入砂内，目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　再加入石油醚冲洗拄壁，液体浸入砂内，加洗脱液开始层析，可以看到不同色带如图片1，直至第一条色带洗脱完毕，在拄下面用试管接收第一条色带的洗脱液，如图片2。　　五、【实验结果】　　实验结果如下图：　　图一：层析柱中出现黄色带　　图二

8、：提取出的黄色胡萝卜素　　结果分析：　　洗脱过程中，首先有一条黄色的色带圈沿着层析柱下移，色带圈的各个方向的移动速度并不是完全相同，原因在于层析柱的制作过程并不完全均一，使层析柱内部不均匀，以至于色带各方向的移动速度不同。最后收集得到亮黄色的胡萝卜素。　　七、【注意事项】　　1、萃取时不要剧烈振荡，以防止发生乳化现象。　　2、为了保持柱子的均一性，使整个吸附剂浸泡在溶剂或溶液中是必要的，否则当柱中溶剂或溶液流干时，就会使柱身干裂，影响渗透和显色的均一性。