色谱分析导论ppt课件.ppt

《色谱分析导论ppt课件.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、§11—1色谱法及其分类★色谱法是一种分离技术，是混合物最有效的分离、分析方法。俄国植物学家茨维特在1906年使用的装置——色谱原型装置，如右图所示。茨维特实验一、色谱：色谱法又叫色层法、层析法，以试样组分在固定相和流动相间的溶解、吸附、分配、离子交换或其他亲和作用的差异为依据而建立起来的各种分离分析方法。色谱柱：进行色谱分离用的细长管。固定相：管内保持固定、起分离作用的填充物。流动相：流经固定相的空隙或表面的冲洗剂。色谱法分离实质：当流动相中携带的混合物流经固定相时，其与固定相发生相互作用。由于混合物中各组分

2、在性质和结构上的差异，与固定相之间产生的作用力的大小、强弱不同，随着流动相的移动，混合物在两相间经过反复多次的分配平衡，使得各组分被固定相保留的时间不同，从而按一定次序由固定相中流出。两相及两相的相对运动构成了色谱法的基础二、色谱的分类：1.按流动相和固定相的物理状态分类：色谱气相色谱（流→气）液相色谱（流→液）气－固色谱气－液色谱液－固色谱液－液色谱2.按产生分离过程的相系统的形式分类：柱色谱法毛细管色谱法平板色谱法用玻璃柱子做色谱柱，固定相填装在柱子中用毛细管做色谱柱，固定相填装在管壁用平整的板子作固定相支

3、持的载体，固定相平铺在板上3.按分离过程原理分类：吸附萃取静电作用和扩散扩散生物特性吸附色谱分配色谱离子交换色谱凝胶色谱生物亲和色谱4.按展开程序分类：洗脱法顶替法迎头法组分与固定相作用力＞流动相与固定相作用力组分与固定相作用力＜流动相或其他物质与固定相作用力三、色谱分离过程：色谱分离过程是在色谱柱内完成的§11—2色谱流出曲线和术语一、线性洗脱色谱：1.分配等温线与分配系数K：●分配等温线：在一定温度下，溶质在固定相与流动相之间的分配曲线，此曲线称为分配等温线。●分配系数K：分配等温线的斜率。①若K与浓度无关

4、，则分配等温线为直线；②在色谱过程中，图中的C、D型很少出现；A、B型常见，但不能用于测定；③在溶质浓度低时，Cs基本上正比于Cm，曲线近似直线。2.线性洗脱色谱：●在色谱中，分配系数K为常数时所进行的色谱过程，即称为线性洗脱色谱。结论：CS值大，则K值大，溶质进入固定相的量就多。推论：溶质流过色谱柱时，分配系数K值大的组分通过色谱柱所需时间长，而K值小的组分通过色谱柱所需时间短。当样品中各组分在两相的分配系数K不同时，就能实现差速迁移，达到分离的目的。二、相关术语：色谱图：色谱柱流出物通过检测器时所产生的响应

5、信号对时间的曲线图。纵坐标为信号强度，横坐标为保留值。只有流动相通过检测器时，在实验操作条件下，反映检测器噪声随时间变化的曲线。色谱峰（样品峰）顶点到基线之间的垂直距离，以h表示。保留值：（热力学因素）——即组分在色谱柱中固定相上停留的时间。不被固定相吸附或溶解的组分进入色谱柱时，从进样开始到柱后出现该物质的峰极大点时所需的时间，用tM表示。被分析组分从进样开始到柱后出现被分析组分的峰极大点时所需要的时间（它包括组分通过色谱柱所需时间和组分与固定相作用所需的时间。），用tR表示。某组分的保留时间扣除死时间后所剩

6、的时间，用表示。=tR-tM①式中各项单位可用min、s、cm等表示；③保留时间是色谱定性的基本依据，但同一组分的保留时间受流动相流速的影响，因此，色谱定性分析常采用保留体积等定性。=tR-tM②实际上是组分在固定相中停留的总时间；死体积VM：指色谱柱在填充后，柱管内固定相颗粒之间的空间、色谱仪器管路的空间及检测器的空间的总和。或者说，在死时间内通过色谱柱的流动相体积。VM=tM×F0（流动相流速，L/min）保留体积VR：在保留时间内通过色谱柱的流动相体积。即将组分从柱中带出所需的流动相体积。VR=tR×F0

7、相对保留值r21：某组分2与组分1的调整保留值之比。某组分的保留体积扣除死体积后的剩余体积，称为该组分的调整保留体积。=VR-VM调整保留体积：①r21只与色谱柱温度和固定相的性质有关，与色谱柱的柱长、柱径、填充情况以及流动相流速无关，因此，它是一个广泛使用的定性数据；②r21绝对不是两组分的VR或tR之比；③在多元混合物分析时，通常选择一对最难分离的物质对，将它们的相对保留值作为重要参数。在这种情况下，r21可用α表示：为后出峰的组分的调整保留时间，故α总是大于1的。分配比k：也称容量因子。它是指组分在固定相

8、和流动相中的分配量之比。区域宽度：（动力学因素）标准偏差σ：0.607倍峰高处色谱峰宽的一半。峰高一半处对应的峰宽，用Y1/2表示。色谱峰两侧拐点上的切线在基线上的截距，用Y表示。Y＝4σ§11—3色谱分析基本原理一、色谱法中组分分离条件A、B两组分沿色谱柱移动时，不同位置处的浓度轮廓①两组分的分配系数必须有差异；②区域扩宽的速率应该小于区域分离的速率；必要条件③在保证快速分离的前提下