《色谱分析导论》PPT课件

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1、提纲方法原理色谱分离理论色谱定性定量分析提纲方法原理色谱分离理论色谱定性定量分析抗坏血酸的生物活性L(100%)D(无)L异(无)D异(5%)1方法原理LD异1.1混合组分的分离AE03-B萃取器1方法原理多级串联离心萃取机（实现多级串联逆流洗涤或萃取）1方法原理1.2色谱分离1903年俄国植物学家茨维特分离植物色素1方法原理混合色素CaCO3石油醚绿色层(叶绿素A）黄色层（叶黄素）黄色层(胡萝卜素)洗出液1.2.1色谱分离原理P111固定相:将填入玻璃管或不锈钢管内静止不动的一相（固体或液体）；

2、流动相:自上而下运动的一相（气体或液体）；色谱柱:装有固定相的管子（玻璃管或不锈钢管）。1方法原理当流动相中样品混合物经过固定相时，会与固定相发生作用;由于各组分在性质和结构上的差异，与固定相相互作用的类型、强弱也有差异;在同一推动力的作用下，不同组分在固定相滞留时间长短不同，各组分按先后不同的次序从固定相中流出。1方法原理1.2.2色谱法的分类气相色谱(GC):气体为流动相的色谱分析方法气固色谱(GSC)气液色谱(GLC)液相色谱(LC):液体为流动相的色谱分析方法液固色谱（LSC）液液色谱(L

3、LC)超临界流体色谱(SFC):流动相的色谱分析方法1方法原理1方法原理流动相气体液体方法名称气相色谱液相色谱固定相固体吸附剂液体固体吸附剂液体方法名称气-固色谱气-液色谱液-固色谱液-液色谱1.3色谱流出曲线及有关术语P1221.3.1基线在实验操作条件下，色谱柱后没有样品组分流出时的流出曲线称为基线，稳定的基线应该是一条水平直线，但实际中存在漂移。1方法原理1.3.2色谱流出曲线1方法原理1.3.3色谱峰峰高:色谱峰顶点与基线之间的垂直距离峰面积:组分的流出曲线与基线所包围的面积定量分析的主要

4、依据1方法原理标准偏差对应0.607峰高的一半峰宽值半峰宽W1/2对应0.5峰高的宽值W1/2=2.354峰底宽度WW=41方法原理1.3.4死时间tM/死体积VM不被固定相吸附或溶解的物质进入色谱柱时，从进样到出现峰极大值所需的时间称为死时间，它正比于色谱柱的空隙体积。1方法原理信号tM进样1.3.5保留时间tR/保留体积VRP123试样从进样到柱后出现峰极大点时所经过的时间或流出的体积。1方法原理信号进样tR1.3.6调整保留时间tR//调整保留体积VR/某组分的保留时间扣除死时间后，称

5、为该组分的调整保留时间或流出的体积。tR´=tRtMVR´=VRVM1方法原理信号进样tR/1.3.7分配系数KP124分配色谱的分离是基于样品组分在固定相和流动相之间反复多次的分配过程，而吸附色谱的分离是基于反复多次的吸附-脱附过程。1方法原理1.3.8分配比kP124分配比又称容量因子，指在一定温度和压力下，组分在两相间分配达平衡时，分配在固定相和流动相中的质量比。1方法原理分配系数K与分配比k的关系K=k.相比率(β)反映各种色谱柱柱型特点的一个重要参数。填充柱，β值一般为6~35毛细

6、管柱，β值为60~6001方法原理1.3.9色谱流出曲线的用途从色谱流出曲线中，可得许多重要信息：根据色谱峰的个数，可以判断样品中所含组分的最少个数；根据色谱峰的保留值，可以进行定性分析；根据色谱峰的面积或峰高，可以进行定量分析；色谱峰的保留值及其区域宽度，是评价色谱柱分离效能的依据；色谱峰两峰间的距离，是评价固定相（或流动相）选择是否合适的依据。1方法原理提纲方法原理色谱分离理论色谱定性定量分析提纲方法原理色谱分离理论色谱定性定量分析2.1塔板理论P124把色谱柱比作一个精馏塔，沿用精馏塔中塔板

7、的概念来描述组分在两相间的分配行为，引入理论塔板数作为衡量柱效率的指标。色谱柱是由一系列连续的、相等的水平塔板组成。每一块塔板的高度用H表示，称为塔板高度，简称板高。2色谱分离理论在每一块塔板上，溶质在两相间很快达到分配平衡，然后随着流动相按一个一个塔板的方式向前移动。对于一根长为L的色谱柱，溶质平衡的次数：n=L/Hn:理论塔板数与精馏塔一样，色谱柱的柱效随理论塔板数n的增加而增加，随板高H的增大而减小。2色谱分离理论塔板理论指出：当溶质在柱中的平衡次数，即理论塔板数n大于50时，可得到基本对称

8、的峰形曲线。在色谱柱中，n值一般很大，如气相色谱柱的n约为103~106，因而流出曲线可趋近于正态分布曲线。(2)当样品进入色谱柱后，只要各组分在两相间的分配系数有微小差异，经过反复多次的分配平衡后，仍可获得良好的分离。2色谱分离理论n与半峰宽及峰底宽的关系式：n=5.54(tR/W1/2)2=16(tR/W)2在tR一定时，如果色谱峰很窄，则说明n越大，H越小，柱效能越高。实际上反映色谱柱的分离效能:n有效=5.54(tR/W1/2)2=16(tR/W)2H有效=L/n有效2