高考生物一轮复习 1-1生物技术的实践课件 教科版选修1.ppt

《高考生物一轮复习 1-1生物技术的实践课件 教科版选修1.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、第1讲　微生物的利用大肠杆菌的培养和分离。分离以尿素为氮源的微生物。知识点一　大肠杆菌的培养和分离1．大肠杆菌：革兰氏、兼性厌氧的肠道杆菌。2．细菌的繁殖：以的方式繁殖，分裂速度很快。3．细菌的扩大培养：用培养基，划线分离用培养基。4．大肠杆菌的分离操作技术最常用方法是划线分离法，其操作步骤是：a．培养基灭菌：将配制好的50mLLB液体培养基和50mLLB固体培养基分别装入两个250mL的三角瓶中，加上封口膜，用进行灭菌。阴性分裂LB液体LB固体平面高压锅b．倒平板：在酒精灯火焰旁将固体培养基分别倒在4个培养皿中，使培养基铺平培养皿底部，待凝

2、，使之形成平面。c．接种扩大培养：靠近酒精灯火焰将大肠杆菌接种到三角瓶的中，三角瓶在37℃，每分钟20转的摇床中振荡培养12h。d．划线分离：将摇床上培养12h的菌液在固体培养基的平板上，然后将盖好的培养皿倒置，放在37℃恒温培养箱中进行培养，12～24h后，可看到在划线的末端出现不连续的单个菌落，表明菌已被分离。液体培养基连续划线e．菌种保存：在无菌操作下将单菌落用接种环取出，再用法接种在空白斜面上，在37℃下培养24h后，置于4℃冰箱中保存。思考1：灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？提示：以免接种温度太高，杀死菌种。划线知识点

3、二　分离以尿素为氮源的微生物1．实验原理：不同微生物利用氮源种类。有一些细菌含有脲酶，通过降解尿素作为其生长的氮源。尿素在脲酶的降解下产生，使培养基的pH由原来的中性变为，于是培养基中的酚红由红黄色变成。2．实验步骤(1)制备培养基：在60℃左右时，将两个三角瓶中已灭菌的LB固体培养基和固体培养基，在酒精灯旁分别倒入两个培养皿中，摇匀后平放至凝固。不同NH3红色尿素碱性(2)制备细菌悬液：将土样1g，在无菌条件下，加到有99mL无菌水的三角瓶中，振荡10min，即成10－2土壤稀释液，依此方法制备出10－3、10－4和10－5的土壤稀释液。(

4、3)涂布法分离：取0.1mL稀释10－4和10－5的土壤稀释液，分别加到有LB培养基和尿素培养基的培养皿中，用灭菌的玻璃刮刀将菌液涂布到整个平面上。(4)培养和观察：在37℃恒温箱中培养24～48h，观察。灼烧法菌落数3．预测本实验的结果：LB全营养固体培养基上的菌落；尿素固体培养基上的菌落，一定时间内，菌落周围出现区域。用浓度为10－4和10－5土壤稀释液接种，更容易形成单菌落的是10－5土壤稀释液。思考2：在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？提示：不能，空气中的微生物可能在皿

5、盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。多而杂少而纯红色(1)菌液划线分离的方法(2)分离以尿素为氮源的微生物注意事项①选择培养基：以尿素为唯一氮源；②以LB全营养基为对照；③培养基需高压蒸汽灭菌；④通过G6玻璃漏斗过滤尿素溶液使之无菌。(3)培养基的制作是否合格的验证：如果未接种的培养基在恒温箱中保温1～2天后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。判断正误(1)对异养微生物来说，含C、H、O、N的有机物既是碳源，又是氮源(√)(2)病毒与细菌不同，不能用普通培养基培养，而是用活细胞培养，常用于培养病毒

6、的是活鸡胚(√)(3)大肠杆菌是革兰氏阳性厌氧型的肠道杆菌，在肠道中一般对人有害(×)(4)单菌落的分离是消除污染杂菌的通用方法，也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一(√)微生物的培养与分离高考地位：5年3考(2011·全国课标卷，2009·宁夏高考……)【典例1】(宁夏理综卷)(1)在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑________、________和渗透压等条件。由于该细菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、________、________等优点，因此常作为遗传学研究的实验材料。(2)在微生物培养操作过程中，为防止

7、杂菌污染，需对培养基和培养器皿进行________(消毒、灭菌)；操作者的双手需进行清洗和________；静止空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还能_____。(3)若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的________。(4)通常，对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的_______________。(5)培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是__________

8、_____。(6)若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及培养物必须经过________处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。解析本题主要考查微生物培养的综合知识。消毒