病毒载体研究进展学习资料.ppt

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1、病毒载体研究进展基因载体系统病毒载体系统非病毒载体系统腺病毒载体反转录病毒载体腺伴随病毒载体单纯疱疹病毒载体慢病毒载体裸DNADNA-阳离子脂质复合物DNA-蛋白质复合物细胞内包装细胞外包装DNA-阳离子多聚物DNA/RNA嵌合物中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室（北京宣武区迎新街100号）GeneGeneexpressionsystemGenedeliverysystemGenevectorsystem病毒载体概述（2）优点：1、利用病毒天然的感染性进入细胞，转导效率高；2、复杂的装配过程由细胞完成；3、不同的

2、病毒载体具有不同的表达特点。存在的问题：1、安全性2、靶向性3、有效性细胞毒性染色体毒性免疫毒性转导靶向性转录靶向性转导效率靶向性基因表达水平和持续时间表达的可调控性常用的病毒载体的特点：病毒载体研究方向1、病毒包装系统2、无病毒基因的病毒载体6、自我扩增型病毒载体7、条件增殖型病毒载体5、嵌合型病毒载体3、靶向性病毒载体4、可调控表达的病毒载体8、新病毒载体病毒载体包装系统组成：1、宿主细胞2、辅助元件（辅助质粒、辅助病毒）3、被包装的DNA/RNA包含顺式作用元件单因素生产系统（one-componentsystem)双因素生产系

3、统(two-componentsystem)gagpolenvLTRLTR图1反转录病毒包装系统示意图图2腺病毒包装系统示意图293cellE1a,bJM17AdShuttle293cellE1a,b多因素生产系统(multi-componentsystem)多因素系统双因素系统图3腺病毒伴随病毒包装系统示意图hostcellHelpervirusHelperplasmidrepcapVectorplasmidHostcell+vectorDNAHelpervirus+helperplasmid图4双因素系统生产重组AAV病毒示意图

4、proviralcellRecombinanthelpervirus(rHSV-repcap)repcap无病毒基因的病毒载体被包装的DNA/RNA中不含任何病毒编码基因，只保留其复制和包装所必需的顺式作用元件。获得的重组病毒颗粒具有野生型病毒的外壳/外膜和感染性，但不表达病毒蛋白。腺伴随病毒载体：反转录病毒载体：腺病毒载体：单纯疱疹病毒载体：LTRLTRgenegeneITRITRpAgeneITRITRpAgenepacorigenegenegenegene无辅助病毒包装系统图5重组AAV无辅毒包装系统adenovirusgen

5、eITRITRaavvectorplasmidE2aE4orf6VAHelperplasmid:293细胞E1a,bcre293-cregeneITRITRAdenoviruswithpackagingsignalflankedbyloxP图6mini-adnovirus无辅毒包装系统靶向性病毒载体转导靶向性转录靶向性（特异性）改造病毒外壳/外膜连接靶向性结合分子Modifiedadenoviruscell组织特异性启动子肿瘤选择性启动子细胞周期调控启动子肿瘤血管内皮导向启动子双特异性启动子病毒增殖的特异性转录调控可调控表达的病毒载体

6、细胞的调控元件病毒的调控元件人工合成的调控元件细胞特异性转录细胞启动子病毒启动子albuminMVMP4TyrosinaseorTRP-1B19promoterPSAHBVMBPJCVMCKEBVGFAPNSEKDR/flt-1AFPCEAerbB2HREMDR1P1tTAtetOpgeneP1tTAtetOpgenetTAtetOpgenetetOp四环素调控合成的转录因子GAL4PRVP16RXREcRVP16FKB12ZFHD-1FRAPP65rapamycinRU486GAL4ERVP16ESTRADIOLGAL4ERp65D

7、iphenolindenemuristerone重组病毒的生产和纯化小量制备和纯化大量制备和纯化场所细胞培养细胞裂解病毒分离病毒纯化制剂保存培养瓶转瓶、细胞工厂、发酵罐反复冻融机械法或化学法裂解实验室中试车间离心离心、超滤、萃取密度梯度超速离心浓缩、柱层析配方缓冲液低温病毒载体与基因治疗产业化基因治疗产品的知识产权构成1、治疗基因2、调控元件3、改造的外壳/外膜4、靶向分子5、包装系统6、生产和纯化技术7、制剂和保存技术产业化的组织和实施：1、合作开发2、专业分工3、政府支持和企业投资4、利益分配基因治疗的三个核心部分1、基因载体系统

8、2、基因表达系统3、治疗基因知识产权和基础研究专利对学术研究的影响1、无影响（对非常早期研究）2、有影响（对临床试验和可能的商业开发）基因治疗领域的知识产权主要通过专利系统来保护对于基因治疗公司最重要的专利是：1、载体系