检出限和定量限的建立与验证EP17-Appt课件.pptx

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1、检出限和定量限的建立与验证前言NCCLS制订的标准文件EP17-AProtocolsforDeterminationofLimitsofDetectionandLimitsofQuantitation;ApprovedGuideline内容四.结果报告二.空白限和检出限的建立与验证三.定量限的确认与验证一.名词解释五.小结一.名词解释空白限（limitofblank,LoB）：（一定概率下）空白样本可能被检测得到最高测量结果。并非被测物的实际浓度；是确保阳性信号在实际浓度处成为检出限；检出限（limitofdetection,LoD）：检测系统或方法所能检测出的分析物的最低浓度。分析灵敏度；

2、检测底限；最小检出浓度定量限（limitofquantitation,LoQ）:一定实验条件下，在精密度和正确度可接受的情况下检测系统能够得到可靠结果的被测物最低浓度。三者关系：LoB

3、r,TE）:能影响分析准确度的确定误差的组合[EP15-A2]。在EP17-A文件里用偏倚（bias）和不精密度来表示。二.空白限和检出限的建立与验证2.1简介多次检测空白样本和低浓度样本图1.空白样本和低浓度样本测定结果的分布图二.空白限和检出限的建立与验证2.1简介多次检测空白样本和假定低浓度样本图2.空白样本和假定低浓度样本（LoD）重复测定结果的分布图二.空白限和检出限的建立与验证2.2空白限和检出限的建立2.2.1空白限计算公式假设：高于第95百分位数的值被认为与空白检测存在明显区别，即被测物存在。第一类错误（αerror）：假阳性第二类错误（βerror）：假阴性一般默认，α=β

4、=5%空白样本检测结果符合高斯分布（正态分布、对称分布），计算公式：LoB=µB+1.645σB（1）µB和σB分别表示空白检测的平均值和标准差。空白样本检测结果不符合高斯分布（非对称分布），计算公式：LoB=PctB100-α，PctB=NB(95/100)+0.5（2）NB分别表示检测次数；PctB（percentile）是第95百分位数，称为空白低限。二.空白限和检出限的建立与验证2.2.2检测限计算公式第二类错误（βerror）：假阴性一般默认，β=5%，即当样本浓度为LoD时其有95%的概率超过LoB。低浓度样本检测结果符合高斯分布（正态分布、对称分布），计算公式：LoDtent=

5、LoB+cβSDS（6）cβ=1.645/(1-1/(4xf))cβ是标准正态分布第95百分位的单侧界值；fisthedegreesoffreedomofthe estimatedstandarddeviationSDS，检测次数-样本数。低浓度样本检测结果不符合高斯分布（非正态分布）若SDS是常数，计算公式：LoD=LoB+DS,β.（7）DS,β是中位数-第β位数；低浓度样本检测结果不符合高斯分布（非正态分布）而且SDS不是常数，则使用“试验-错误”程序，至β=5%位数值>LoB（或者计算

6、2.3实验设计检测分析系统：状态稳定（无试剂或校准物改变），单一分析系统或检测仪器，操作条件稳定（试剂批号不变）。但是建议考虑时间、批间、样本间及仪器的差异。样本数：建立，至少60次检测；验证，至少20次（建议多样本、多天、多次测定）。样本要求：实验样本应与实际样本具有互通性。例如，血清、血浆。[EP7,EP14]低浓度样本尽量来自临床样本。（空白样本和低浓度样本注意事项）检测结果：任何参数、性能、变量，定义明确。测定值应可溯源至国际单位（SI），或追溯至可知水平。二.空白限和检出限的确认与验证2.2.4空白限的建立（LoB）至少60次空白样本检测（一个或多个样本，建议多个样本）。空白样本检

7、测结果符合高斯分布（正态分布、对称分布），计算公式：LoB=µB+1.645σB,（1）空白样本检测结果不符合高斯分布（非对称分布），计算公式：LoB=PctB100-α，PctB=NB(95/100)+0.5（2）厂家、方法开发者完成。二.空白限和检出限的确认与验证2.2.4空白限的建立（LoB）举例：正态分布--LoBLoB=µB+1.645σB（1）LoB=µB+cβSDSc95,116=1.645/(