悬浮细胞的传代培养.doc

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1、悬浮细胞的传代培养关键词：细胞菌株标准物质中心北京标准物网1)训练目的熟练掌握悬浮细胞的传代培养法。2）买验原理体外培养的原代细胞或细胞株要在体外持续地培养就必须传代，以便获得稳定的细胞株或得到大量的同种细胞，维持细胞种的延续。放平细胞瓶，当发现悬浮细胞长到瓶壁85％～90％时，从容器中取出细胞，以1：2或1：3以上的比率转移到另外的容器中进行培养，即为悬浮细胞的传代培养。3)实验材料CO2培养箱、倒置显微镜、超净工作台、培养瓶、试管、移液管、巴斯德吸管、废液缸、75％酒精棉球、酒精灯、悬浮细胞株、完

2、全培养基(RPMLl640或DMEM)。4)操作步骤A.热培养用液：把已经配制好的培养液瓶子放人37℃水浴锅内预热。B.用75％酒精棉球擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。C.正确摆放使用的器械：保证足够的操作空间，不仅便于操作而且可减少污染。D.点燃酒精灯：注意火焰不能太小。E.超净工作台内拆除已消毒空培养瓶的外包装。F.取出预热好的培养用液：取出已经预热好的培养用液，用酒精棉球擦拭好后放人超净工作台内。G.从培养箱内取出悬浮细胞：注意取出细胞时要旋紧瓶盖，用75％酒精棉球擦拭显微镜的台面，再在镜

3、下观察细胞。H.静置：超净工作台内将需传代的培养瓶直立静置半小时左右，待大部分细胞都沉降到细胞瓶底，轻轻吸出1／2～2／3的旧培养基。I.分瓶：加入新鲜培养液，按1：2或1：3的比例分装到2或3个培养瓶中，再逐瓶加入新鲜培养基。若想节约时间，并且离心对细胞影响也不大，可采用离心的方式取代静止分离。将培养瓶中的悬浮细胞从培养箱中取出，超净工作台内将所有含细胞的培养液转入离心管，1000r／min。离心5min，弃上清。加入定量新鲜培养基重悬后以1：2或1：3的比例分装到2或3个培养瓶中培养。如果实验需要

4、，可以在分瓶前计数，细胞的浓度一般不低于5x105个／mL。做好标记。