小麦萌发前后淀粉酶活性的比较(精)课件.ppt

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1、小麦萌发前后淀粉酶活性的比较一、实验目的及要求：1，学习分光光度法测定酶活力的原理与方法；2，了解小麦萌发前后淀粉酶活力的变化。二、实验的基本原理淀粉酶是水解淀粉的糖苷键的一类酶的总称。实验证明，在某些植物如小麦、大麦的休眠种子中只含有β–淀粉酶，α-淀粉酶是在发芽过程中形成的，所以在禾谷类萌发的种子和幼苗中，这两类淀粉酶都存在。其活性随萌发时间的延长而增高。本实验以淀粉酶催化淀粉生成麦芽糖的速度来测定酶的活力。麦芽糖是还原性糖，能使3，5-二硝基水杨酸还原成棕色的3-氨基5-硝基水杨酸，后者在500nm处有最大吸光度，而进行定量测定。三、主要仪器设备及实

2、验耗材：小麦种子、可见分光光度计、离心机、恒温水浴，研钵等。标准麦芽糖、0.2%淀粉、3，5----二硝基水杨酸溶液、1%氯化钠溶液、0.02mol/L磷酸缓冲液、石英沙。四、实验内容或步骤：1．麦芽糖标准曲线制作取7支干净的具塞刻度试管，编号，按表35–1加入试剂：表1制作麦芽糖标准曲线配方表试剂管号1234567麦芽糖标准液（ml）00.20.40.81.21.62.0蒸馏水（ml）2.01.81.61.20.80.403,5-二硝基水杨酸2222222摇匀摇匀，置于沸水浴中煮沸5min。取出后流水冷却，加蒸馏水定容至20mL。以1号管作为空白调零点，

3、在500nm波长下比色测定。以麦芽糖含量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。2、萌发小麦种子浸泡小麦种子24h，入25°C恒温箱或在室温下发芽。3、提取小麦萌发前后的酶液（1）幼苗酶的提取：取萌发的幼苗10株，入研钵加石英砂0.2g，1%NaCl3ml，研磨成匀浆，0-4°C下放置20min。离心，2000r/min10min.测定上清酶液的总体积。（2）种子酶的提取：取干燥种子10粒作对照，操作方法同上。4、二硝基水杨酸法测定酶活力量取待测酶液1ml，pH6.9的0.02mol/L磷酸缓冲液稀释10倍，作为酶活力测定物。取6根试管按下表加各物质：表

4、2试剂试管编号1/2（种子酶稀释液）3/4（幼苗酶稀释液）5/6（空白管）V（0.2﹪淀粉溶液）/ml111V(蒸馏水)/ml----0.5V(稀释酶液)/ml0.50.5--混匀各管，40°C恒温水浴，水解3min，加入1%3，5-二硝基水杨酸溶液2ml。入沸水浴，准确加热5min，迅速冷却至室温，加水稀释至20ml，混匀。测定各管的A500nm值５、计算酶活力单位总酶活力单位=(C酶—C0)×n×V酶式中：C酶为种子酶或幼苗酶分解淀粉产生的麦芽糖的浓度（mg/ml）；C0为表2中空白管的麦芽糖浓度；n为酶溶液稀释的倍数；V酶为提取酶液的总体积（ml）。

5、设在40°C、pH6.9的条件下，3min内水解淀粉释放1mg麦芽糖所需要的酶量为1个活力单位（U）。五、思考题1、为什么提取酶液的过程应该在0-4℃下进行？测定淀粉酶活性时为什么要在40℃条件下水解淀粉？2、小麦萌发过程中淀粉酶活性升高的原因和意义是什么？