实验四小麦萌发前后淀粉酶活力的比较课件.ppt

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1、小麦萌发前后淀粉酶活力的比较实验目的1熟悉分光光度计的原理和使用方法；2学习测定淀粉酶活力的方法；3了解小麦萌发前后淀粉酶活力的变化。实验原理种子中贮藏的糖类主要以淀粉的形式存在。淀粉酶能使淀粉分解为麦芽糖。2（C6H10O5）n+nH2O——nC12H12O11麦芽糖有还原性，能使3，5－二硝基水杨酸还原成棕色的3－氨基5－硝基水杨酸，后者可用分光光度法测定。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计在540nm波长下测定吸光值，便可求出样品中还原糖的量休眠种子的淀粉酶活力很弱，种子吸胀萌

2、动后，酶活力逐渐增强，并随着发芽天数的增长而增加。本实验观察小麦种子萌发前后淀粉酶活力的变化。萌发和出苗germinationvs.emergency实验材料1器材：移液管乳钵离心机水浴锅分光光度计2试剂和材料：小麦种子，标准麦芽糖溶液，pH6.9磷酸缓冲液，淀粉溶液3，5-二硝基水杨酸，氯化钠操作步骤1.种子发芽小麦种子浸泡2.5小时后，放入25℃恒温箱内或在室温下发芽。（一般在光照培养箱内，2-3天后开始萌发）2.酶液提取取发芽第3或第4天的幼苗15株，放入乳钵内，加1%氯化钠溶液10mL,用力磨碎。在室温下放置20分

3、钟，搅拌几次。然后将提取液离心6～7分钟（1500r/min）。将上清夜倒入量筒，测定酶提取液的总体积。进行酶活力测定时，用缓冲液将酶提取液稀释10倍（1mL酶提取液+9mL缓冲液）。取干燥种子或浸泡2.5小时后的种子15粒作为对照（提取步骤同上）。3.酶活力测定（1）取25mL刻度试管4支，编号。按下表要求加入各试剂（各试剂须在25℃预热10分钟）。试管号试剂1234干燥种子（或浸泡2.5小时后）的酶提取液发芽3或4天幼苗的酶提取液标准管空白管酶液（mL）0.50.5--标准麦芽糖溶液（mL）--0.5-1%淀粉溶液（mL

4、）1111水（mL）---0.5将各管混匀，放在25℃水浴中，保温3分钟后，立即向各管中加入1%3，5－二硝基水杨酸溶液2mL。（2）取出各试管，放入沸水浴中加热5分钟。冷至室温，加水稀释至25mL。将各管充分混匀。（3）用空白管作对照：在A540nm处测定各管的光吸收值，将读数填入下表。试管号1.干燥种子的酶提取液2.发芽3、4天幼苗的酶提取液3.标准4.空白光吸收值（A540nm）4.计算根据溶液的浓度与光吸收值成正比的关系，即：A标准C标准——＝——A未知C未知则：c（酶液管中麦芽糖的浓度）=A酶×C标准／A标准式中：

5、c为浓度；A为光吸收值。本实验规定：25℃时3分钟内水解淀粉释放1mg麦芽糖所需的酶量为1个活力单位。则15粒种子或15株幼苗的总活力单位为：总活力单位=c酶×n酶×V酶式中：c酶为酶液中麦芽糖的浓度；n酶为酶液稀释倍数；V酶为提取酶液的总体积。思考题1提纯酶的过程需要注意什么问题？2为什么测定酶活力时要保温3分钟？反应后又放入到沸水浴？3研磨时加加1%氯化钠溶液的作用（离子强度和渗透压）。谢谢