定量PCR操作流程课件.ppt

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1、双击该图标，打开软件出现此界面，确认选择为第一个（QuantitativePCR），点击OK此处3个按钮，自左向右依次为设置、运行、分析选中实验中所用的孔，与仪器上相对应随后在Welltype的下拉选框里选择相应的Unknown（待测样本）、NTC（阴性对照）、Standard（标准品）。理论上试剂盒带4个浓度的标准品，每次实验使用。阴性对照设置1个。选中Unknown孔，随后在CollectFluorescencedata下面的FAM打上勾。对Standard、NTC做同样的操作接下来，对标准品进行赋值。目前显示未赋值的情况，可以看见每一个Standard显示均为0选中其中一个Stan

2、dard（标准品）孔，在Standardquantity右侧的方框里填入相应的值。比如，试剂盒提供的第一个标准品浓度为50000，就在方框内填入。此时面板上的孔里也显示相应的值。依次对剩下的3个标准品进行赋值，如图所示，4个标准品孔分别代表50000-50000000的4个浓度。点击此标签，进入程序设置界面。可根据试剂盒的说明进行设置。一般，有UNG酶启动和预变性两步。如图示最左方50度表示UNG酶消化，95度表述预变性每个步骤的温度显示在横线下方，上方为时间如果试剂盒说明为2步法扩增，则表示95度和60度两个温度，选择Normal2Step。如果为3步法扩增，则表示95度、55度和72

3、度三个温度选择Normal3Step。当板、程序全部设置完全后，点击Run进入运行界面。点击Start点击Start会弹出此保存对话框选择合适的路径，保存实验结果，并开始实验。实验结束后无需再次保存。快速导入模板方法假如已有实验结果，日后进行同类实验时可直接使用Import（模板导入）功能。点击Import弹出此对话框，找到作为模板的文件，打开即可导入板设置。快速导入模板功能导入程序设置方法：选择Custom，点击Import，按前述方法导入模板的程序设置如何观察结果在Analysis结果分析界面下，选择扩增曲线Amplificationplots观察扩增曲线选择Standardcurv

4、e可以观察标准曲线的相关系数（Rsq），扩增效率（Eff）。选择InitialtemplateQuantity（起始模板浓度），可以观察每一个孔的起始拷贝数选择Textreport可以更方便地观察每一个样品的拷贝数情况。