植物离体快速繁殖.ppt

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1、第五章植物离体微繁主要内容：1.植物离体微繁2.影响植物离体微繁成功的因素3.植物离体微繁过程中常见异常现象及对策植物有哪些繁殖方法？思考:分株繁殖压条繁殖播种繁殖嫁接繁殖扦插繁殖组织培养繁殖1.植物离体微繁植物离体微繁(micropropagation)：是指利用植物组织培养技术进行的一种营养繁殖方法，是常规营养繁殖方法的一种扩展和延伸。是在短期内获得大量遗传性状一致的个体的方法。属离体无性繁殖(propagationinvitro)。又称为快速繁殖（rapidcloneprogagation）。植物离体微繁的特点1.繁

2、殖系数高，繁殖周期短，繁殖速度快：它的高速度是以下三种因素构成的：①有较高的增殖倍数;②较短的增殖周期；③周年生产。2.应用广泛，是推广良种的重要手段：占用空间小，生产效率高，省时、省工、节约土地。3.繁殖材料用量少，不受季节限制，可实现工厂化生产；4.能获得无毒苗木无性系5.木本植物应用潜力大：繁殖各种珍稀、濒危、名贵、突变物种。1.1植物离体微繁过程第一阶段稳定无菌培养体系的建立时期第二阶段稳定培养系的增殖、生长和增状时期第三阶段诱导茎芽生根形成小苗时期第四阶段生根小苗移栽和驯化时期第五阶段商品苗培育时期第一阶段：稳定

3、无菌培养体系的建立时期任何植物细胞或组织培养体系的建立，都必须采制适宜的外植体。外植体的选择有什么要求呢？第一，选择优良的种质：①易于离体培养的种类、品种、类型；②生产或研究上意义比较大的种类、品种、类型。第二，选择健壮的植株：第三，选择合适的部位茎尖：生长速度快，遗传稳定，无病毒分布。但材料来源有限，为此茎段也是重要来源。叶片：采用幼嫩的叶片较好。如：秋海棠、矮牵牛、菊花等。花（花蕾）：据一些学者的观点，在花诱导之前细胞的脱分化容易发生，故外植体常取发育早期阶段的花，即花蕾。胚：大多数花卉都可用胚培养的方式进行快繁，如：

4、百合、羽叶甘蓝、蝴蝶兰、卡特兰等。外植体的选择第四，取材季节合理：①选取外植体的季节和时间，对培养材料的启动和培养至关重要。②一般在生长季—春夏。第五，考虑器官的生理状态和发育年龄；第六，选择大小合适的外植体；外植体过大，不易灭菌，过小，不易成活。一般0.5-1cm；脱毒培养0.2-0.5cm。外植体的灭菌无菌的外植体材料是植物组织培养成功的重要前提与可靠保证，而消毒则是获得无菌外植体的有效方法。取来的外植体需要经过仔细的表面灭菌处理，外植体灭菌常用消毒剂。消毒注意事项：1.正确选择消毒剂种类及浓度、消毒时间，减少组织的死

5、亡.2.在用消毒剂对材料表面消毒后，必须用无菌水漂洗3次以上以除去残留杀菌剂，但用酒精消毒时，则不必漂洗。3.与消毒剂接触过的切面在转移至无菌基质前需切除，因为消毒剂会阻碍植物细胞对基质中营养物质的吸收。4.在外植体污染严重时，应用流水漂洗1h以上或先种子培养得到无菌种苗，然后用其各个部分建立组织培养。5.Hgcl2效果最好，但较难从外植体去除，对人的伤害也最大，用后要用水冲洗至少5次。外植体的接种和培养外植体的接种—无菌操作外植体表面灭菌—切取分离—无菌培养基外植体的培养光照、温度、湿度、培养基pH、气体调节接种材料修整

6、与冲洗材料表面灭菌1.叶片0.5cm×0.5cm2.微茎尖0.2-0.5mm3.带节茎段0.5-1.0cm外植体切割4.芽丛分离①顶梢切割成0.5－1.0cm的茎尖；（除叶,剥去休眠芽的鳞片)；②茎尖流水冲洗2－4h；③75%酒精迅速漂洗30s；④0.1%升汞或稀释20倍的次氯酸钠液消毒5－8min(取自老枝条上的可适当延长时间)；⑤无菌水冲洗3-5次。材料处理及消毒外植体接入培养基注意无菌培养体系的建立需注意下面两个问题：1.采样和表面灭菌；2.首次接种污染率的估算与对策：首次接种，小容器，多数量，尽量分散，互相隔离，效

7、果最好。从植物组织培养积累的知识中，可将植物再生过程划分为四种方式：1)顶芽和腋芽的发育2)不定芽的发育3)体细胞胚状体的发生与发育4)原球茎的发育第二阶段：稳定培养系的增殖、生长和增状时期（诱导外植体生长与分化）1)顶芽和腋芽的发育顶芽和腋芽在离体培养中都可被诱导而发育。从芽萌发出苗，即枝条，枝条向上延伸，新形成的芽将逐渐发育。如果将新形成的芽切割下来，使之再萌发出新的枝条，在适当的条件下使枝条生根，并种植到土壤中去，便完成了植物再生的全过程。适宜这种再生繁殖的植物，在采样时只能采用顶芽，侧芽或带有芽的茎切段，其它如种子

8、，萌发后取枝条等也可以。幼嫩茎尖营养芽茎尖培养在顶芽的培养中，还有较为特殊的一种方式，即采用极其幼嫩的顶芽的茎尖分生组织为材料，由它作为外植体。过去常被称为“分生组织培养”，但目前多数学者认为以称作“茎尖培养”为宜。真正的茎尖分生组织是被限制在一极小的范围内，那里的细胞几乎没有分化，在活跃地进行细胞分裂