阿托品拮抗豚鼠回肠M受体的pA2值测定.doc

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1、实验十阿托品拮抗豚鼠回肠M受体的pA2值测定071232001陈小凤2010/5/9【目的】1．掌握pA2值的测定方法及其意义。2．观察阿托品对豚鼠回肠M受体的竞争性拮抗作用。3.了解离体平滑肌基本实验方法。【动物】豚鼠【药物】①乙酰胆碱（2X10-5、2X10-4、2X10-3、2X10-2、2X10-1、2mol/L）②阿托品（5×10-5、5×10-4、5×10-3mol/L）③台氏液【器材】：100μl微量注射器、量筒、培养皿、缝衣针、缝线、洗瓶、RM6240多媒体化生物信号记录分析系统、肌力换能器、HSS-1（B）型恒温浴槽

2、、GW-3G恒温平滑肌槽。【方法】1.仪器安装调试：（1）搭建好仪器后，打开水浴锅电源，使浴槽温度保持在37℃。清洗浴槽，加台氏液20ml。通气，使气泡呈碎花状释放。（2）启动计算机，双击RM6240生物信号采集处理系统，打开“阿托品拮抗豚鼠回肠M受体的pA2测定”，设置实验参数，示波。2.标本制备：豚鼠回肠由教师制备提供。取豚鼠回肠约2cm，对角结扎，一端固定在浴槽的通气钩上，另一端垂直连接于肌力换能器的感应片上，调节基础张力约为0.5g（记录过程中张力持续变大并出现波动）。肠管在槽内稳定十五分钟后，记录正常收缩活动。3.观察项目（

3、1）未加阿托品时每个Ach累积（ml/L）引起的肠管最大收缩幅度。（2）分别加入阿托品（3个浓度）后，每个Ach累加浓度引起的肠管最大收缩幅度。4.给药方案（给药量如表一所示）（1）用微量注射器向麦氏浴槽内从低到高加入Ach溶液，当每个浓度引起的肠管收缩反应达到最大时，立即累加另一个浓度，直到收缩反应不再增加。（2）用台氏液冲洗标本3～5次，回肠恢复正常后，加入5×10-5mol/L阿托品20ul后，重复步骤⑴。（3）用台氏液冲洗标本3～5次，回肠恢复正常后，加入5×10-4mol/L阿托品20ul后，重复步骤⑴。（4）用台氏液冲洗标

4、本3～5次，回肠恢复正常后，加入5×10-3mol/L阿托品20ul后，重复步骤⑴。5.数据处理【结果】由于我们组实验过程中，未能在每个浓度引起肠管收缩反应达到最大时及时加入药品，并且实验过程中时不时碰到悬挂的吊线，造成实验结果有较大偏差。因此，我们借鉴了周三第3组的实验数据进行分析。图一乙酰胆碱累积给药及张力变化汇总以下分别就各阿托品浓度（0、5*10-8、5*10-7、5*10-6mol/L）的拮抗作用分别分析。图二Ach累积给药张力变化（阿托品=0mol/L）图三Ach累积给药张力变化（阿托品=5*10-8mol/L）图四Ach

5、累积给药张力变化（阿托品=5*10-7mol/L）图五Ach累积给药张力变化（阿托品=5*10-6mol/L）首先，区域测量导出结果绘制下表。表一乙酰胆碱累积给药及张力变化Ach浓度加药量Ach终浓度负对数加入阿托品后肠管最大收缩高度（g）（mol/L）（ul）（mol/L）05×10-85×10-75×10-62×10-51010-880.871.1090.2360.042203×10-87.51.011.5330.0730.017010-771.2663.230.0550.0122×10-4203×10-76.51.4710.90

6、80.0590.027010-662.110.8730.1360.0132×10-3203×10-65.52.570.8650.2250.047010-552.940.8530.2260.0142×10-2203×10-54.52.721.1910.0550.2617010-443.151.6032.070.0672×10-1203×10-43.53.082.280.7990.0137010-332.82.570.6810.0142203×10-32.53.063.32.070.645由上表可知乙酰胆碱引起最大收缩高度Emax=3.3

7、g。然后，计算每个Ach浓度下收缩高度与最大收缩高度的比值E/Emax，列于表二中。表二阿托品对乙酰胆碱引起豚鼠回肠平滑肌收缩量效曲线的影响Ach浓度加药量Ach终浓度加入阿托品后张力变化E/Emax(%)（mol/L）（ul）（mol/L）05×10-85×10-75×10-62×10-51010-826.433.67.21.3203×10-830.646.52.20.37010-738.497.91.70.42×10-4203×10-744.627.51.80.67010-663.926.54.10.42×10-3203×10-6

8、77.926.26.81.27010-589.125.86.80.42×10-2203×10-582.436.11.77.97010-495.548.662.72.02×10-1203×10-493.369.124.20