托品对乙酰胆碱的竞争性拮抗作用及PA2值测定

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1、中国试剂网4.2.3.17托品对乙酰胆碱的竞争性拮抗作用及PA2值测定实验目的1．掌握PA2值的测定方法及其意义2．观察阿托品对乙酰胆碱的竞争性拮抗作用教学时数2学时实验原理1、激动药与拮抗药（1）激动药(agonist)：与受体有亲和力又有内在活性药物。完全激动药(fullagonist):α=1部分激动药(partialagonist,mixedagonist):与受体有亲和力，但内在活性较弱（α<1）的药物。（2）拮抗药(antagonist)：与受体有亲和力，而无内在活性的药物（α=0）。①竞争性拮抗药(competit

2、iveantagonist)与激动药竞争同一受体的拮抗药。激动药的量效反应曲线可以被竞争性拮抗药平行右移。如果增加竞争性激动药浓度，仍可达到Emax。②非竞争性拮抗药（noncompetitiveantagonist）与激动剂作用于同一受体，结合牢固，分解慢或是不可逆的，或作用于相互关联的不同受体。2、PA2值PA2是一种用以表示竞争性拮抗剂作用强度的指标，其意义是能使激动剂提高到原来的2倍时，可产生与原来浓度相同效应所需的拮抗剂克分子浓度的负对数(-log(B))。PA2的值越大说明拮抗剂的作用越强。pA2是拮抗参数(anta

3、gonismparameter)：当有一定浓度的拮抗药存在时，激动剂增加2倍时才能达到原来效应，此时拮抗药的负对数即拮抗参数，pA2=-log[I]=-logKI3、药物作用乙酰胆碱作用于豚鼠回肠的M受体，引起肠肌收缩，当加入M受体拮抗剂阿托品后，若提高乙酰胆碱浓度，仍能达到未加拮抗剂前的最大反应，并可使剂量反应曲线平行右移，则表明阿托品对乙酰胆碱呈竞争性拮抗。实验材料1．动物：豚鼠中国试剂网4.2.3.172．器材：RM6240多媒体化生物信号记录分析系统、PC80586计算机、张力传感器、保温式麦氏浴槽、超级恒温水浴、“L”

4、型通气钩、高位吊瓶、量筒、烧杯、培养器、氧气瓶、外科剪刀、眼科剪刀、眼科镊子、缝衣针、棉线、注射器、台式营养器。3．药物：①3×10-4MAtropine②3X10-6—3X10-2MAch实验方法一、首先调试RM6240系统，使进入肌张力测定状态．1．在主菜单中用鼠标选择<实验>中的<消化>，选择系统显示<平滑肌生理特性>。2．在界面右侧控制参数区选择<张力>,〈选择3g〉,扫描速度1.0s/div,确定信号输入，选择〈通道2〉，在工具菜单选择快速归零（空载时钩上无任何东西）。3．在主菜单中选择〈示波〉，进入示波状态。4．在主

5、菜单中工具栏选择〈网格切换〉对背景网格进行切换为细格，并在选项中选择波形颜色红色。此时肌张力测试调试完毕。二、调节仪器：麦氏浴槽中加50ml台氏液，调节温度38℃±0．5℃氧气2--3个气泡／秒，并制备豚鼠回肠标本。三、正式实验：将肠管标本两端用缝衣针各穿一线，一端打一空结(约lcm小套)，另一端穿上长线打结，用眼科镊钳住空结固定于通气钩上，放入麦氏浴槽中，将另端长线的尽端打一空结，挂在张力换能器的小钩上，调节换能器高度，使前负荷为1g(可从标尺上看出来)，稳定标本20分钟。在主菜单下按键选择〈记录状态〉，先描记一段正常曲线，然

6、后按下列顺序给药。向麦氏浴槽中加入3X10-3MAch0．1ml，观察曲线变化，检查肠管是否有兴奋作用，然后冲洗肠管，使其恢复至正常。按表格所给的剂量累积加乙酰胆碱，制作乙酰胆碱的累积量效曲线。具体作法：先加小剂量Ach，若有反应则当反应达最高峰时立即加下一剂量Ach，在每加一次药时都需用标记，只标加药序号，不打药名，直至曲线上升至最高峰不再中国试剂网4.2.3.17升高为止。将系统转入“示波状态”，用台氏液冲洗肠管3遍，稳定标本15分钟，使恢复至正常。在主菜单下选择〈记录状态〉，向浴槽中加3X10-3MAtropine0.1m

7、l，并标记药名，过1分钟后再一次制作Ach的累积浓度量效曲线。在主菜单下选择“结束实验”。激活工具栏，系统进入分析状态。实验结果处理1、在主菜单下分析项可选择区域测量、标记查询、开始反演、鼠标捕捉，测量后按工具栏中取消标志线，分别测出正常曲线及每次加药后的张力大小，最后以乙酰胆碱引起最大收缩力为100％，分别计算各剂量反应的百分率2、再以各剂量反应的百分率为纵坐标，以剂量的负对数为横坐标，绘出剂量反应曲线。3、再根据公式求出PA2值。PA2=-logC[B]-1[A]A：在无阿托品时，引起最大反应的50%时所需乙酰胆碱的浓度。B

8、：在阿托品存在下，引起最大反应的50%时所需乙酰胆碱的浓度。C：为拮抗剂阿托品的浓度。表1NoPreparationofAch(M)volumeml／30mlConcentrationofAchInmagunustube(M)13x10-60.110-823x1