评价大鼠离体肝灌流模型稳定性的方法.pdf

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1、中阖尊科犬擎学报JournalofChinaPharmaceuticalUniversity2014，45(4)：475—479475评价大鼠离体肝灌流模型稳定性的方法丁露，杨加培，孙浩，周旺，于锋(中国药科大学I临床药学教研室，药物质量与安全预警教育部重点实验室，南京211198)摘要以自建的大鼠原位循环肝灌流模型为研究模型，建立一套实用的模型稳定性评价方法。首先进行一般稳定性评价，包括肉眼观察肝脏形态，监测门脉压、灌流液pH，定时检测灌流液K浓度、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平，肝组织病理检查等；要求在整个灌流过程中肝脏色泽均匀，无

2、斑块状改变，以门静脉压始终无骤变，稳定在8—14mmHg范围内，变化不超过0．5mmHg／30min，pH始终处于7．4～7．2，变化不超过0．1／30min，K浓度无突然升高现象，灌流液中ALT、AST水平随时间无显著性变化，肝组织病理检查不出现除空泡性变以外的病变为标准，确定模型可维持稳定的时间。在满足一般稳定性的基础上，根据不同的研究目的对模型进行功能稳定性评估，要求研究所用的指标能在空白灌流组和阳性药灌流组之间体现显著性差异；本研究以药物肝损伤研究为例，以灌流液ALT、AST、LDH(乳酸脱氢酶)水平为指标，并进行肝组织病理检查，结果两组出现极显著性差异

3、，故判定用所建立的灌流模型进行肝损伤研究可真实反映受试药的肝损伤情况，一般不会出现假阴性和假阳性结果。关键词肝灌流模型；稳定性评价；异烟肼；肝损伤中图分类号R285文献标志码A文章编号1000—5048(2014)04—0475—05doi：10．11665／j．issn．1000—5048．20140416ViabilityassessmentforliverperfusionmodelsofratsDINGLu，YANGJiapei，SUNHao，ZHOUWang，YUFengDepartmentofClinicalPharmacy,ChinaPharmac

4、eutical劫eKeyLaboratoryofDrugQualityControlandPharwuwovigilancerChinaPharmaceuticalUniversity)，MinistryofEducation，Nanjing211198，ChinaAbstractThen-siturecirculatingratperfusedlivermodelinourlabwastakenasanexample．Asetofmethodswereintroducedforevaluatingtheviabilityofisolatedliverperfu

5、sion．Fimfly，aseriesofmeasurementsincludinggrossappearanceoftheliver，pressureofportalvein，pHofperfusate，concentrationofpotassium，levelsofcytosolicenzymesandmorphologyweresuggestedtoprovideanadequategeneralassessmentofviability．Thelivershouldbeahomogeneous，pinkish—browncolorduringperfu

6、sion；whitespotscausedbyairemboliandredspotsduetononhomogeneousperfusionshouldbeabsent．Thepressureofportalveinshouldnotgobeyond8—14mmHgorraisemorethan0．5mmHg／30min．ThepHofperfusateshouldnotfluctuatemorethan0．1／30minandbe7．4—7．2allthetime．Suddenincreaseinperfusatepotassiumwasforbidden．

7、SignificantchangesofALT(alanineami—notransferase)andAST(aspartateaminotransaminase)levelsalongwiththeperfusiontimewerenotallowed．Theperfusedlivershouldshownootherpathologicalchangesexceptvacuolizationafterthewholeperfusion．Secondly，furtherobservationandexaminationoffunctionalapplicab

8、ilitywereext