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《IL-7联合IL-2对脐血CD4^+CD25^-T细胞体外诱导扩增影响的研究.pdf》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、仉洁等IL_7联合IL-2对脐血CD4CD25一T细胞体外诱导扩增影响的研究第7期·879·doi:10.3969/j.issn.1000-484X.2014.07.004IL.7联合IL.2对脐血CIM+CD25一T细胞体外诱导扩增影响的研究①仉洁郝京生②李俊甫邢龙龙②刘志文②钟理刘薇②(河北大学生命科学学院,保定071002)中图分类号11392.12文献标志码A文章编号1000-484X(2014)07-0879-06[摘要]目的:初步探讨IL-7联合IL-2对脐血CD4CD25一T细胞体外扩增的促进作用,建立稳定的体外培养扩增脐血CD4C
2、D25一Tregs的培养体系,比较诱导扩增后的CIMCD25Tregs和自然分选的CD4CD25Tregs对PBMCs功能活性的影响。方法:采用免疫磁珠分选法分选出脐血CIMCD25一T细胞和CIMCD25T细胞;加入不同浓度的细胞因子IL-7结合适当浓度的IL一2作为诱导剂,分析IL-7体外诱导CD4CD25一T细胞增殖的有效性及最适浓度。我们利用流式细胞术检测体外扩增后的CIMCD25一T细胞表型变化;MTS法检测体外诱导扩增的CIMCD25Tregs及自然分选的CD4CD25Tregs分别对成人外周血中单个核细胞增殖的抑制作用;RT-PCR
3、方法分析体外诱导扩增的C1MCD25Tregs及自然分选的CD4CD25TregsFOXP3基因、IL-l0基因和TGF-B基因的eDNA表达的变化。结果:经3周体外培养、各组细胞均有明显的扩增。IL-7诱导组的扩增最强。体外抑制试验显示体外扩增的Tregs对成人外周血中单个核细胞有明显的抑制作用,IL-7联合IL-2诱导CD4CD25一T细胞生成的CD4CD25Tregs具有较自然分选的CIMCD25Tregs稍弱的免疫抑制功能,其中IL-7浓度为4ng/ml,IL-2浓度为2000U/ml时诱导CD4CD25一T细胞生成的CD4CD25Tre
4、gs杀伤活性最强。结论:成功建立了CD4CD25Tregs的体外培养体系,联合应用IL-7、大剂量的IL-2和CD3/CD28单抗是体外诱导扩增CIMCD25一T细胞成为CIMCD25Tregs的优选方法,并且扩增倍数高、可持续高表达CD4及CD25细胞表型。[关键词]白介素7;脐血;CD4CD25T细胞;调节性T细胞EfectsofIL-7andIL-2onCD4CD25一TcellsproliferationinvitroZHANGJie,HAOJing—Sheng,LIJun-Fu,XINGL0ng—L0ng,LIUz-Wen,ZHONGL
5、i,LIUWet.CollegeofLifeScience,HebeiUniversity,Baoding071002。China[Abstract]Objective:ToexplorethepromotingeffectsofIL-7andIL-2onCD4CD25一TcellsproliferationinvitroandconstructastableculturesysteminvitroforCD4CD25regulatoryTcellsfromhumanumbilicalcordblood.Tocomparetheinhibitin
6、geffectsbetweeninducedproliferatedCIMCD25TregsandnaturallyisolatedCD4CD25TregsonPBMCsfunctionalactivity.Methods:CIMCD25一TcellsandCD4CD25Tcellswereisolatedfromhumanumbilicalcordbloodmononuclearcellsbymagneticactivatedcelsorting(MACS)systemandthenexpandedinvitro.Fourdifferentco
7、ncentrationlevelsofIL-7combinedwithproperconcentrationofIL-2wereaddedasinducerandtheeficiencyandoptimalconcentrationofIL-7oninducing,CD4CD25一Tcellswereanalyzedvia4differentmethods.FlowcytometrymethodwasusedtodetectthechangesofCD4CD25一Tcells.TheinhibitoryeffectofexpandedCD4CD2
8、5Tcellsonperipheralbloodmononuclearcells(PBMCs)wastestedbyMTS.Theexp
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