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时间:2020-04-28
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1、嘧肽霉素一种新的生物活性组分分离纯化研究 摘要:通过生物活性检测发现Streptomycestz92菌株嘧肽霉素发酵液中一种新的抗细菌生物活性物质,为了明确其适宜的分离纯化工艺,试验研究了利用大孔吸附树脂,硅胶柱层析和分子筛层析分离纯化该组分的条件和效果。试验结果显示,发酵液经过大孔树脂SP825L吸附50%甲醇洗脱、硅胶柱层析氯仿∶正丁醇∶甲醇∶乙酸=42∶2∶4∶2洗脱、SephadexLH-2070%甲醇洗脱可以得到该组分纯品。 关键词:嘧肽霉素;分离纯化;生物活性 中图分类号:S482.2;R978.7文献标识码:A文章
2、编号:0439-811418-3728-04 IsolationandPurificationofANewBio-activeIngredientinCytosinpeptidemycinFermentationBroth MULing-xiao,FUYing,ZHAOXiu-xiang,WUYuan-hua Abstract:Anewanti-bacteriabio-activecompoundinCytosinpeptidemycinfermentationbrothwasfoundbybioassayana
3、lysis.Inordertodevelopaproperseparationandpurificationtechniqueforthecompound,conditionsandeffectswereinvestigatedbysilicagelcolumnchromatographyandmolecularsievechromatographywithmacroporousadsorptiveresin.Resultsshowedthatpurecompoundcouldbeobtainedthroughabsorptionof
4、SP825Landelutedby50%methanol,silicagelcolumnchromatographywithChloroform∶1-butanol∶methanol∶aceticacid=42∶2∶4∶2,SephadexLH-2070%methanolasmobilephases. Keywords:Cytosinpeptidemycin;isolationandpurification;bio-activity 自从20世纪40年代青霉素问世以来,抗生素的研究和应用引起了人们极大的兴趣,陆续开发出了一系列
5、针对人类和动物疾病的抗生素品种,其影响也逐渐涉及到农业及其他领域。最早研究农用抗生素的是美国和欧洲,随后日本迅速崛起,并形成了四大新农用抗生素品种――灭瘟素S、春日霉素、多氧霉素和有效霉素,在农业生产中得到广泛应用[1-3]。 嘧肽霉素是由土壤中分离筛选出来的不吸水链霉菌辽宁变种产生的次生代谢产物[4],可作为一种新型、高效的抗病毒[5-8]和抗真菌[9]生物农药。目前已经报道的2种从嘧肽霉素产生菌发酵液中分离的具有抗病毒作用的物质[10,11],都是胞嘧啶核苷肽类化合物。沈阳农业大学植物保护学院植物病毒实验室以烟草赤星病菌为颉颃对
6、象进行筛选,新发现了一种生物活性物质。本研究明确了分离方法,为进一步确定该物质的结构、生物功能和应用研究奠定了基础。 1材料与方法 1.1仪器 慧德易Quicksep50中压层析系统,Agilent1100LC/MSDTrap型液质联用系统;DIKMADiamonsilⅡC18反相柱;PerkinElmerLambda25紫外可见分光光度计;ThermoScientificBarnsteadNanopure超纯水系统。 1.2菌种和培养基 菌种:嘧肽霉素产生菌Streptomycestz92,分离指示菌为烟草赤星病菌,均由沈
7、阳农业大学植物保护学院植物病毒实验室分离保存。 斜面和平板培养基:烟草赤星病菌培养基;高氏麦麸培养基;发酵培养基:可溶性淀粉47g,花生饼粉22g,酵母粉2g,2SO42.7g,NaCl2.7g,CaCO32.7g,去离子水1000mL,pH值7.2。所有培养基均121℃灭菌30min备用。 1.3试验方法 1.3.1菌株发酵粗提液制取菌株的发酵采用二级发酵,无菌条件下,用无菌水制成菌株Streptomycestz92的孢子悬浮液,高氏麦麸培养基上每皿加入0.5mL菌悬液,铲刮均匀,置于28℃恒温培养箱中培养4d,待菌落表面颜色
8、变为深灰色,表明大部分孢子已成熟,即可用于发酵。将培养皿中菌株Streptomycestz92孢子刮下,配成约为1×108个/mL的孢子悬浮液。250mL三角瓶装发酵培养基40mL,接孢子悬浮液4mL,用透气封口膜封口,
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