不同采血管对核酸检测结果的影响

《不同采血管对核酸检测结果的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、不同采血管对核酸检测结果的影响采用核酸检测(NAT)技术对献血者血液标本进行筛查，采血管是提高血液安全性的重要举措。NAT技术的灵敏度极高，其缩短检测窗口期的能力远远高于血清学方法，但是如果标本的采集、处理、保存不当，会造成病毒核酸降解，从而影响检测结果的真实性，降低核酸检测本身的灵敏度，对血液安全带来潜在风险。对此，试剂和采血管的厂方说明书都提出了各自对于标本处理的指导意见。但是不同实验室标本采集过程，运输、保存条件不尽相同，对标本质量的影响也存在差异。为确保血液标本满足NAT检测要求，我们采用不同的试验方案

2、，验证不同品牌无菌无RNAase真空采血管、保存温度、离心前保存时间等对NAT检测结果的影响。为选择符合NAT要求的采血管、优化标本控制过程、制定核酸检测策略等提供数据支持。   1材料与方法   1.1材料1)采血管:从市售采血管中选择3种EDTAK2抗凝的，有分离胶，一次性无菌无RNAase真空采血管，根据生产厂家不同，称为A、B、C采血管。2)检测标本:试验用阴性标本:对献血者全血标本进行血清学检测和NAT检测，将检测结果呈HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、HBVDNA、HCVRNA、HIV-1RNA阴

3、性的标本进行汇集，作为试验用阴性标本。试验用HBV阳性血浆:从HBsAg、HBVDNA检测结果呈阳性，其余项目检测结果呈阴性的献血者全血标本中分离的血浆，经HBVDNA定量检测，HBV浓度为1.24×104IU/ml。试验用HCV阳性血浆:从抗-HCV、HCVRNA检测结果呈阳性，其余项目检测结果呈阴性的献血者全血标本中分离的血浆，经HCVRNA定量检测，HCV浓度为6.88×103IU/ml。试验用HIV-1阳性血浆:从抗-HIV、HIV-1RNA检测结果呈阳性，其余项目检测结果呈阴性的献血者全血标本中分离的

4、血浆，经HIV-1RNA定量检测，HIV-1浓度为1.08×105IU/ml。3)试剂:NAT联检和鉴别检测分别采用，NAT定量检测采用COBASAmpliPrep/COBASTaqManHCVTest试剂(批号:N11304，，血清学检测所用试剂均为血液中心常规检测试剂。4)检测设备:NAT联检和鉴别检测采用ProcleixTigris系统，NAT定量检测采用RocheCAP/CTM系统。   1.2标本保存温度、离心前保存时间及采血管对NAT联检试验结果的影响将血清学和NAT检测结果均呈阴性的全血标本，以每

5、6份标本混为1份的原则进行混匀;向混匀后的标本中加入已知浓度的HBV或HCV或HIV-1阳性血浆，使HBV或HCV或HIV-1的终浓度分别为50IU/ml、60IU/ml和150IU/ml;混匀后的全血标本分别分装至采血管A、B、C中，形成3组试验标本，分别标记为A组、B组和C组。然后每组标本再分为2个亚组，分别置于4℃和30℃保存;于0h(阳性对照)、4、6、8、10、12、24h分别取一定数量的标本，在1000g条件下离心10min，之后在原温度下继续保存;在25h进行NAT联检检测，统计分析检测结果。  

6、 1.3标本保存时间、采血管对NAT鉴别试验结果的影响按照1.2所示方法将制备好HBV(50IU/ml)、HCV(60IU/ml)或HIV-1(150IU/ml)的弱阳性全血标本混匀后分装至A、B、C3种真空采血管中，形成3组试验标本。再将不同组、不同病毒种类的标本分为7个小组，全部标本在1000g条件下离心10min后在4℃保存。依次于0d(阳性对照)、1、2、3、4、5、6、7d的同一时间取1组标本进行NAT鉴别检测。分析统计不同保存时间对HBV或HCV或HIV-1弱阳性标本NAT鉴别试验结果的影响。   

7、1.4保存时间对HCV阳性标本NAT定量结果的影响选取9份检测结果呈抗-HCV、HCVRNA阳性，HBsAg、抗-HIV、HBVDNA、HIV-1RNA阴性的献血者全血标本，使用血清学及NAT检测结果均呈阴性的血浆分别进行稀释，使其成为HCV含量在1.04×102IU/ml～4.86×103IU/ml之间的弱阳性标本。再将每个弱阳性标本等量分成8份放置于真空采血管A中。全部标本在1000g条件下离心10min后，4℃保存。依次于0、1、2、3、4、5、6、7d的同一时间取1组标本进行定量HCVRNA检测。分析研

8、究4℃保存条件下保存时间对血浆中HCVRNA浓度的影响。   1.5统计学方法标本保存温度、标本离心前保存时间及采血管对NAT联检试验结果影响的研究、及标本保存时间对NAT鉴别试验结果影响的研究均采用卡方检验进行实验结果的统计分析;保存时间对HCV阳性标本定量结果影响的研究采用SPSS17.0软件进行重复测量数据的方差分析。P＜0.05和＜0.01，认为差异有统计学意义。   2结果