《多功能酶标仪》PPT课件.ppt

《《多功能酶标仪》PPT课件.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、酶标仪的使用主要内容一、ELISA法介绍二、酶标仪和多功能酶标仪三、仪器操作一、ELISA法介绍经典的化学分析方法（如滴定分析、重量分析、分光光度法）能对化学体系组分进行常量或微量分析，而对复杂生物体系的微量成分的测定往往力不从心。在此背景下，科学家研发了一系列测定生物体系成分含量的方法，其中免疫化学法（如酶联免疫法、免疫荧光法、放射免疫法）因具有高特异性、超微量分析生物体有机成分的特点而得到迅速推广和发展。1971年人们建立了用酶来标记抗原或抗体的分析技术，使得原来极其微乎其微的抗原或抗体在数分钟后就可被识别出来，并进行定量，这

2、种技术被称为酶联免疫吸附试验法，简称ELISA。（Enzyme-LinkedImmuno-SorbentAssay）酶联免疫法的专用仪器就是酶标仪。分析原理酶标仪的分析原理与分光光度法一样，服从朗伯比尔定律。物质的含量与显色液的颜色深浅成正比，而颜色深浅可用吸光度表示，所以物质的含量与吸光度值成正比。酶标记抗原或者抗体发生免疫学反应后，与底物的结合物，在特定波长下有最大吸收，可通过测定显色液的吸光度对待测物进行定量。ELISA法知识1.免疫学知识2.常用的ELISA分析3.ELISA应用1.免疫学知识什么是抗体？什么是抗原？什么是

3、抗原抗体反应？什么是抗体(Antibody)？抗体是机体受抗原刺激后，在体液中出现的一种能与相应抗原发生反应的球蛋白，称免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)。人类免疫球蛋白有五类，即IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。含有免疫球蛋白的血清称免疫血清。免疫球蛋白（Ig）免疫球蛋白（Ig）是机体受抗原刺激后产生的，其主要作用是与抗原起免疫反应，生成抗原-抗体复合物。可以阻断病原体对机体的危害，也可以引起过敏反应或其他有害反应。免疫球蛋白的结构免疫球蛋白都是大分子的物质，轻链和重链，且具有抗原结合的部位。什么是抗原(An

4、tigen)？凡能刺激机体产生抗体，并能与抗体发生特异性结合的物质称为抗原。物质所具有的这种特性称为抗原性。抗原的物质可以是机体自身的成分如蛋白、酶、多肽或者多糖。也有外来的抗原（如病毒、污染物）。抗原的特异性各种抗原物质的化学组成虽然很复杂，但能刺激机体产生抗体并与抗体反应相结合的化学组成，仅仅是抗原物质表面的一些具有活性的化学基团、化学结构及空间构型，被称为抗原物质决定簇。分子结构的差异性，决定各种物质抗原的特异性。抗原抗体反应抗原与抗体的反应统称为免疫学反应。在体内进行的抗原抗体反应称为免疫反应，在体外进行的抗原抗体反应称为

5、血清学反应。没有抗原的刺激，机体不能产生抗体；利用抗体可以检测抗原物质。ELISA法特点ELISA法是建立在抗原与抗体免疫学反应的基础上，因而，具有特异性。由于测定中需要酶标记抗原或抗体，酶分子与抗原或抗体分子的结合物可以催化底物分子发生反应，产生放大作用，正因为此种放大作用而使本法具有很高的敏感性。2.常用的ELISA分析1).测定抗原2).测定抗体(1)测定抗原A将抗体吸附于固相表面，这个过程叫包被。B加抗原，形成抗原-抗体复合物。C加酶标抗体。D加酶反应的底物。反应终止时，反应液的颜色深浅与抗原的含量成正比。主要步骤1.包被

6、抗体的酶标板（一抗）。2.加待测抗原。抗原抗体反应，洗涤。3.加酶标抗体（二抗）。反应，洗涤。4.加显色底物（三抗），反应，洗涤。5.加终止液。6.酶标仪上读取吸光度值。7.根据标准曲线对待测抗原进行定量。(2)测定抗体A抗原包被在酶标板。B加抗体，形成抗原抗体复合物。C加酶标抗体（一抗）D加酶底物（二抗），显色，比色。ABCD3.ELISA方法的应用原则上ELISA可用于检测一切抗原、抗体及半抗原，可以直接定量测定体液中的可溶性抗原。在实际应用中它和医学、生物化学、免疫学、微生物学、药理学、环境学等方面密切相关。举例医学方面：肿

7、瘤研究中检测甲胎蛋白；检测过敏原；检测血清中白蛋白及免疫球蛋白；传染病诊断中检查乙型肝炎表面抗原。环境科学方面：测定污染物抗原干预下生长因子、细胞因子、酶的变化。其他：植物组织浆液中检查植物病毒；普通比色分析。二、酶标仪和多功能酶标仪普通酶标仪多功能酶标仪1.普通酶标仪即酶联免疫检测仪(ELISAReader）Bio-RadModel5504万元光源光电检测器电信号经前置放大、对数放大、模数转换等滤光片或单色器酶标仪结构及原理光源：钨灯滤光片：常用的波长范围：405nm450nm(四甲基联苯胺)490nm(邻苯二胺)630nm单色

8、器：可调节波长的光比色装置：聚苯乙烯塑料微孔板：96孔光电检测器酶标仪与光度计的区别波长：4-6个比色装置：酶标板，非比色杯光路：垂直功能：不能波长扫描；只在固定波长的可见光范围测定；可对化学物及生命组分进行终点分析。酶标仪的应用普通酶标仪基本功能