黄霉素产生菌的菌种选育和发酵工艺的研究.pdf

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1、黄霉素产生菌的菌种选育和发酵工艺的研究StudiesonStrainBreedingandFermentationProcessofFlavomycin领域U制药工程研究生U王洛菊指导教师U黄鹤副教授企业导师U徐延礼高级工程师天津大学研究生院2012年4月独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作和取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢之处外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得U天津大学U或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡

2、献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：签字日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解U天津大学U有关保留、使用学位论文的规定。特授权U天津大学U可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘。（保密的学位论文在解密后适用本授权说明）学位论文作者签名：导师签名：签字日期：年月日签字日期：年月日0B中文摘要本论文通过研究黄霉素产生菌株的选育及其发酵工艺条件优化，所得研究结果与

3、我公司2010年初黃霉素菌株的效价水平相比，摇瓶效价提高了2355u/mL，50L中试发酵罐效价水平提高了1647u/mL（连续三批中试产品的平均值），显著降低了我公司黃霉素产品的生产成本。首先，通过氮离子注入诱变法确定黄霉素产生菌耐自身代谢产物的浓度。通过比较不同剂量氮离子注入诱发的黄霉素产生菌株的致死率和正突变率结果，确定出最佳氮离子注入剂量。黄霉素产生菌经诱变，其单菌形态发生了很大变化。经实验得出，发酵产素能力高的菌株呈表面光滑，边缘无皱褶或少量皱褶。经过大量的初筛和复筛后，得到一株黃霉素高产菌株，且遗传稳定性良好

4、。其次，对高产菌株的发酵培养基配方，如碳源、氮源、无机盐、表面活性剂等原材料进行优化，得到最佳培养基配方为：葡萄糖浓度4%，玉米浆浓度3%，黄豆饼粉浓度1%，K2HPO4浓度0.20%，NaCl浓度0.3%，MgSO4浓度0.06%，CaCO3浓度0.03%，有机硅消泡剂浓度0.12%；经过PB试验设计和响应曲面试验设计，得出影响黄霉素发酵效价的三个重要因素及其浓度，葡萄糖：浓度5.56%，玉米浆：浓度1.15%，黄豆饼粉：浓度2.56%。再次，对所得高产菌株的发酵条件，如温度、pH、装液量、接种量、种龄、转速等进行了优

5、化研究，得到最佳发酵条件为：温度37℃，装液量100mL，pH5.0，种龄26h，接重量10﹪，转速210rpm；经过PB试验设计和响应曲面试验设计，得出影响黄霉素发酵的三个重要工艺条件，温度：37℃，种龄：29h，接种量：12.5%。最后，将所得高产菌株放大到中试50L罐，研究通气量、搅拌对溶氧和发-1酵效价的影响。通过优化得到，通气量为2vvm，搅拌转速为200rpm。关键词：菌种选育氮离子注入培养基条件优化发酵工艺条件优化1BAbstractStrainbreedingandfermentationprocesso

6、fflavomycinwerestudiedinthisarticle.Comparedtoflavomycinpotencylevelsin2010,thesestudiesachievedmeaningfulresults:potencyinshakingflaskphaseisincreasedby2355u/mL;potencyin50-Lfermentationtankphaseisincreasedby1647u/mL.Firstly,aconcentrationisestablishedinwhichfla

7、vomycinstrainsareresistanttotheirmetaboliticproducts.Studythemutageniceffectofparentstrainsvianitrogenionimplantationmethod.Anappropriatenitrogenionimplantationdosageischosenviastudythefatalityrateandpositivemutationratecausedbydifferentdosageofnitrogenionimplant

8、ation.Bymeansofpreliminaryscreeningandsecondscreening,ahigh-yieldstrainisachieved,whichpossessesgoodgeneticstability.Secondly,themediumformulapreparedforabovea