微生物基本试验原理及操作.ppt

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1、微生物基本试验原理及操作微生物基本试验碳源和氮源利用试验碳水化合物的代谢试验各种酶类试验氨基酸和蛋白质代谢试验碳源和氮源利用试验柠檬酸盐试验葡萄糖酸盐试验柠檬酸盐试验原理：有些细菌能利用柠檬酸盐作为唯一碳源，分解柠檬酸钠生成碳酸钠，使培养基呈碱性。能利用柠檬酸盐作唯一碳源的细菌，也能利用铵盐作为唯一氮源，铵盐被分解为氨而产生碱性。西蒙氏柠檬酸盐培养基成分MgSO4-7H2O0.2gNH4H2PO41gK2HPO41g柠檬酸钠5g氯化钠5g琼脂20g0.2%溴麝香草酚蓝溶液40ml蒸馏水1000ml结果：阳性者表面上长有菌落，培养基变为蓝色。葡萄糖酸盐

2、试验原理：检查细菌是否具有氧化葡萄糖作为唯一碳源，并具有还原2-酮基葡萄糖酸盐与班氏试剂混合加热生成黄红色酮类的能力。方法：接种大量待检菌于培养基内，35，24-48小时，0.5ml培养基加班氏试剂3滴左右，加热煮沸后观察结果。葡萄糖酸盐蛋白胨肉汤成分蛋白胨0.15g酵母浸膏0.1g磷酸二氢钾0.1g葡萄糖酸钾（或钠）4g蒸馏水100ml结果：出现黄色到橙红色沉淀为阳性，无颜色变化为阴性。碳水化合物的代谢试验氧化-发酵试验（OF试验）糖醇发酵试验B—半乳糖苷酶试验（ONPG试验）甲基红试验VP试验胆汁七叶苷试验氧化-发酵试验（OF试验）原理：细菌在分

3、解葡萄糖的过程中，必须有分子氧参加的称为氧化型；在无氧条件下降解葡萄糖的称为发酵型；不分解葡萄糖的细菌称为产碱型。利用此试验可以区别细菌的代谢类型。Hugh-Leifson二氏培养基（O-F培养基）成分蛋白胨2g磷酸氢2钾0.3克氯化钠5g葡萄糖10g0.2%溴麝香酚蓝溶液12ml琼脂2.5g蒸馏水1000ml方法：将待检菌接种于二支Hugh-Leifson培养基的试管中，均用接种针穿至管底，其中五支加入灭菌的液体石蜡约1厘米厚。35，培养48小时观察结果。培养基颜色变黄即为产酸。结果代谢类型加蜡封口管开放管发酵型产酸产酸氧化型不变色产酸产碱型不变色

4、不变色糖醇发酵试验原理：各种细菌因含有发酵不同糖、醇类的酶，所以分解糖、醇类的能力各不相同。分解糖、醇类后产生的代谢产物可因菌种不同而异，有的产酸、产气，有的仅产酸，故用于鉴别细菌。糖、醇类试验培养基成分蛋白胨水或肉膏汤100ml所需的糖、醇或苷类0.5或1g1.6%溴甲酚紫乙醇溶液0.1ml结果接种的细菌，若能耐分解培养基中的糖类产酸时，则使培养基中的指示剂呈酸性反应。若产气可使半固体培养基内或液体培养基中的倒管内出现气泡。若不分解则无变化。B—半乳糖苷酶试验（ONPG试验）原理：有的细菌可产生B-半乳糖苷酶，此酶可分解邻-硝基酚-B-D-半乳糖苷

5、（ONPG）。ONPG为无色，经B-半乳糖苷酶水解后，可产生黄色的邻硝基酚，即使浓度很低也能检出。结果呈现黄色为阳性反应。迅速及迟缓分解乳糖的细菌ONPG试验为阳性，本试验可作为迟缓发酵乳糖菌株的快速鉴定方法。甲基红试验原理：某些细菌在糖代谢过程中，分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸可进一步被分解为甲酸、乙酸、乳酸等，而使培养基的pH下降至4.5以下，加入甲基红指示剂出现红色（阳性）。甲基红试验原理：有些细菌分解葡萄糖产酸量少，或产生的酸进一步转化为其它物质（如醇、酮、醛、气体和水），则培养基的酸碱度仍在6.2以上，故加入甲基红指示剂呈黄色（阴性）。葡萄糖

6、蛋白胨水培养基成分多价蛋白胨7g葡萄糖5g磷酸氢二钾5g蒸馏水1000ml方法：被检菌接种于上述培养基内，于35℃培养48小时，于2ml培养液内加甲基红指示剂2滴，立即观察结果。结果：红色为阳性；桔红色为弱阳性；黄色为阴性。VP试验原理：有些细菌在葡萄糖的代谢过程中生成丙酮酸，丙酮酸进一步脱羧后可产生乙酰甲基甲醇。乙酰甲基甲醇在碱性溶液中被空气的氧氧化为二乙酰（丁二酮），进而与培养基内蛋白胨中的精氨酸所含的胍基发生反应，生成红色化合物，即VP反应阳性。培养基中的胍基太少时，加入少量含胍基的化合物，如肌酸或肌酸酐等，可加速此反应。试剂：甲液：6%a-萘

7、酚乙醇溶液乙液：40%氢氧化钾溶液方法：将被检菌接种葡萄糖蛋白胨水培养基后，于35培养48小时，于2ml培养基内加入甲液1ml和乙液0.4ml，振摇后观察结果。结果：于数分钟内呈红色为阳性；如无红色出现，而且于35℃中4小时后仍如故者即为阴性。本试验较为敏感。胆汁七叶苷试验原理：在10-14%胆汁存在下，测定细菌水解葡萄糖苷七叶苷为七叶亭和葡萄糖的能力。胆汁七叶苷培养基成分蛋白胨5g牛肉浸膏3g牛胆汁（胆汁）40g七叶苷1g柠檬酸铁0.5g琼脂15g蒸馏水1000ml结果：培养基变为黑色或深褐色为阳性。有生长物时，并不表示七叶苷裂解，仅表示胆汁浓度不

8、能抑制D群链球菌外的细菌生长。各种酶类试验过氧化氢酶（触酶）试验氧化酶试验血浆凝固酶试验硝酸盐还原试验胆汁溶