微生物实验器材与基本操作.ppt

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1、微生物实验器材与基本操作内容实验室的基本设备培养器皿准备培养基的制备灭菌与消毒微生物的无菌操作与检查实验室的基本设备玻璃试管管壁必须较厚，没有翻口接种工具培养皿的准备（一）清洗(清洁的玻璃器皿是得到正确实验结果的重要条件之一）目的：除污垢（灰尘、油污、无机盐）洗涤剂：洗衣粉洗洁精玻璃仪器的清洗新购买的玻璃器皿的清洗（表面附有游离的碱性物质）比色皿的清洗不可用强碱，也不可用超声清洗用洗液浸泡，再用自来水冲洗，应内外不挂水珠使用过的玻璃器皿的清洗一般玻璃器皿染菌的玻璃器皿121℃高压蒸汽灭菌，20~30min染菌的移液管使用后立即放

2、入5%石炭酸溶液中浸泡数小时塑料器皿的清洗硅胶塞：新购置的硅胶塞带有带量的滑石粉，用自来水冲洗，再用2%NaOH溶液煮10~20min。再用自来水冲洗，然后再用5%盐酸溶液浸泡30min，最后再用自来水冲洗。含有琼脂培养基的玻璃器皿用玻璃棒将琼脂培养基刮下琼脂培养基已干燥将器皿放入少量的水中煮沸，使琼脂熔化后趁热倒出洗涤后培养皿的放置（二）包扎（1）培养皿的包扎洗净晾干后的培养皿，用旧报纸包扎，每包6—10套。（2）吸管的包扎（3）试管的包扎塞上合适的试管塞（塞子的1/2~1/3进入试管），然后7—10支一捆用报纸包扎，灭菌。（

3、4）试剂瓶的包扎用报纸或牛皮纸包扎后，灭菌。（5）三角瓶的包扎塞上合适的试管的塞，或盖上8层纱布，外加一层报纸，用棉绳包扎后灭菌。（6）吸头和Eppendorf管吸头根据不同的规格戴手套加入不同的盒子；Ed管放入饭盒中，灭菌，50°烘干后备用。培养基的制备按物理状态分：液体培养基固体培养基1.5%—2%凝固剂半固体培养基少量凝固剂（0.2%—0.7%）常用培养基成分一般细菌牛肉膏蛋白胨培养基：真菌马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）：放线菌高氏1号培养基：霉菌查氏培养基：酵母菌（1）PDA（2）麦芽汁培养基（3）豆汁葡萄糖培养基（4

4、）YPD培养基1%YeastExtract（酵母膏）2%Peptone（蛋白胨）2%Dextrose(glucose)（葡萄糖）若制固体培养基，加入2%琼脂粉（一）液体培养基的配制1、称量2、溶解加水至总容积的4/5左右，慢慢搅拌使其溶解。如有需要，可加热。3、调PH培养基溶解均匀并冷却至室温用PH试纸测PH，用1mol/LNaOH或1mol/LHCl溶液调节PH。（缓慢少量多加搅拌）再加水到所需的量。4、分装分装于三角瓶时，分装量不得超过容积的1/2。5、封口瓶口处盖上6~8层纱布，瓶口布外包一层牛皮纸或两层报纸，用棉绳捆绑。

5、6、灭菌做好标记，放入高压灭菌锅中120℃，20min7、冷却后接种（二）平板培养基的配制1、称量按比例称取一定量的琼脂粉（1.5%—2%），放入三角瓶中。2、按液体培养基的配制1~3步操作，调好PH，定容3、分装分装量不得超过三角瓶的1/24、封口6~8层纱布，再外包一层牛皮纸或两层报纸5、灭菌做好标记，高压灭菌锅中120℃，20min6、冷却放入55℃烘箱或水浴中，温度降至55℃，进入无菌室倒平板。7、倒平板在超净台的酒精灯火焰旁的无菌区内进行操作，右手那装有培养基的三角瓶，拔出试管塞；左手将培养皿的盖在酒精灯火焰旁打开一条

6、缝，让三角瓶口深入；倒入培养基，盖好后顺着超净台边缘将平板推入，平放在超净台上。8、倒置冷却至培养基凝固后，倒置平板，装入保鲜袋中扎好，放入4℃冰箱中保存备用。（三）斜面培养基的配制1、按液体培养基配制1~3步操作，调好PH，定容2、称量称取1.5%~2%的琼脂粉，加入已溶解的药品中，再熔化琼脂（控制火力，防止培养基溢出，不断搅拌），最后补足所失的水分。3、分装趁热分装于试管内，分装量不超过高度的1/5~1/4，不要污染试管塞。4、灭菌加试管塞，7支成一捆，试管塞外包一层牛皮纸，或两层报纸，贴上标签。高压蒸汽锅中121℃，20m

7、in。5、摆斜面温度降至55℃左右，将灭菌后的斜面培养基，趁热放于玻璃棒或移液管上，调整斜度，培养基的斜面不超过试管长度的1/2。6、保存冷却后，装入保鲜袋中扎好，置于4℃冰箱中。（四）半固体培养基的配制1、称量称取0.7%左右的琼脂粉2、同固体培养基相同（五）无菌水的准备1、100ml三角瓶（装有玻璃珠），装双蒸水45ml2、试管装4.5ml双蒸水3、塞上管塞或盖上塑料盖子4、包扎、灭菌5、备用注意事项1、药匙不要混用2、PH：(1)调PH要逐步滴加，勿使过酸过碱，破坏培养基中的某些成分，防止回调或反复调整PH。（2）灭菌后P

8、H会发生改变，要注意检测灭菌后的PH状况。（较特殊的用于确定最适PH，最值PH）3、琼脂：待液体培养基煮沸后，再加入琼脂。4、分装：避免培养基粘到管口或瓶口，如不小心粘上，应立即擦干净。5、制斜面和平板的培养基：温度不宜太高，一般60℃左右。6、试管塞：1/2~