生物技术考点.doc

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1、郑权部分：第一节：基因工程：将目的基因通过体外剪切并与载体连接成重组分了，然后导入受体细胞内，使这个基因能在受体细胞内复制，转录，翻译表达的操作叫做基因工程。基因工程的理论依据：1不同基因具有相同的物质基础；2基因是可切割的；3基因是可以转移的；4多肽与基因Z间存在对应关系；5遗传密码是通用的；6基因可以通过复制把遗传信息传递给下一代。基因T程基本过程：酶切易连接・》转化易鉴定。第二节：凝胶电泳原理：在核酸电泳条件下，核酸分了带负电而向正极的方向迁移，在一定电场强度下，DNA分子的迁移率主要取决于核

2、酸分子本身的分了量大小和构型。Southern印迹法过程：DNA样品的制备・》电泳・》印迹-》杂交・》放射白显影。碱裂解法：1在PH12-12.6碱性环境屮，线性的大分子量细菌染色体DNA变性，而共价闭环质粒DNA仍为自然状态；2将PH调至屮性并有高盐浓度存在条件，染色体DNAZ间交联形成不溶性网状结构，蛋白质在去污剂SDS作用下形成沉淀，而共价闭合质粒DNA仍然为可溶状态，通过离心，可去除大部分细胞碎片，染色体DNA,RNA以及蛋白质；3用乙醉沉淀法获得留在上清液中的质粒DNAoPCR过程：变性・

3、》退火・》延伸；反应的基本成分：模板核酸，耐热DNA聚合酶；引物，镁离了，dNTP和缓冲液。基因工程相关的酶学：II型限制性内切核酸酶，DNA连接酶，DNA聚介酶，反转录酶。目的基因获得方法：化学合成法，酶切育接分离法，PCR扩增法和构建基因组文库。受体细胞选择原则：容易导入重组DNA分子；重组DNA分子在受体细胞内能稳定维持；受体细胞须能识别载体丿』动了，复制序列；受体细胞基因世须同载体所含的选择烈标记相匹配，易于重组体进行筛选；适于外来基因的高效表达；遗传稳定性，易于扩大培养或发酵;符合重组DN

4、A的安全标准。双脱氧链终止法（Sanger,1977年发明）是目前用于DNA序列分析的首选方法。1・基本原理该方法利用了DNA聚合酶所具有的两种特性：第一，DNA聚合酶能够利用dNTP作为底物，以单链的DNA作模板，合成出准确的DNA互补链；第二，DNA聚合酶也能够利用ddNTP作底物，将其掺入到寡核廿酸链的3"■末端，从而终止DNA链的延长。在DNA测序反应屮，加入模板DNA、特异性引物（放射性标记）、DNA聚合酶、dNTP、和一种ddNTP（例如ddATP）,当ddATP掺入到寡核廿酸链生长末端

5、（取代本该由dATP掺入的位置），而ddATP没有3'・0H,寡核廿酸链不再继续延长，发生特异的链终1上反应。ddATP可取代dATP的所有位置，将产生不同长度的DNA片段混合物（5'■末端相同，3'•末端是ddATP）o同样，分别加入ddTTP、ddGTP和ddCTP,在不同试管中温有后，四个反应产物上样于同一尿素变性凝胶的不同上样孔作电泳，再通过放射自显影可读出序列Southernblotting的基本原理：（1）.将待测的DNA分子结合到固相支持物上；（2）.结合在尚相支持物上的DNA分了可与

6、存在于液相屮的探针分了进行杂交。DNA分了杂交所依据的是带有互补的特定核廿酸序列的单链DNA或RNA,当它们混合在一起时，其相应的同源区段将会退火形成双链的结构；(3).与探针(常为同位素标记)杂交示的分了可用放射自显影呈现出来。