微生物检测用培养基质量控制方法-论文.pdf

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1、首都公共卫生2014年8月第8卷第4期CapitalJournalofPublicHealth。Aug．2014Vo1．8No．4中图分类号：R446．5文献标识码：A文章编号：1673—7830(2014)04—0181—02·实验研究·微生物检测用培养基质量控制方法杨翠云【摘要】培养基的正确配制、使用以及质量控制直接关系到微生物检测结果的准确性。现介绍培养基理化、生物学质量控制方法及其基本要求。【关键词】培养基；质量控制；微生物检测微生物实验中影响检测结果准确性的因素很多，培养；(+++)目标菌呈优势生长(80％)；(++)目标

2、其中培养基的质量控制尤为重要¨。培养基是微生菌与干扰菌各占一半；(+)目标菌较少(10％～20％)。物检测的主要试剂类别，其商品化培养基或配制培养2．1．3增菌效果判定：如果在10或10目标菌呈基用试剂质量的优劣、保存是否得当、配制以及使用方优势生长或几乎为纯培养，并参照菌落计数结果算出法是否正确等都对其最终质量有影响。现介绍培养基在10或10。稀释液0．1ml接种的目标菌为1个时，理化、生物学质量控制的方法及其基本要求。则此增菌效果很好，0．1ml接种的目标菌为10个时，则此增菌效果良好，0．1ml接种的目标菌为100个或1培养基

3、理化指标要求及控制方法更多时，则增菌效果不理想。1．1pH值因不同的目标微生物所需的pH不同，2．2分离培养基主要通过观察目标菌是否生长良所以调节pH极为重要，在(23±3)oC范围内，用无好，并具有明显的菌落特征及生化反应差别，同时能抑菌的1mol／L氢氧化钠溶液或1mol／L盐酸溶液调节制其它非目标菌的生长等方法确定其合格与否。pH达到所要求的范围。误差不得超过±0．2。将10倍稀释的质控目标菌悬液，分别取1O～、10～、1．2澄清度目测液体培养基应澄清，固体培养基无10—0．1ml涂布于普通营养琼脂平板与相应的分离培养基平板各

4、2块，置37℃，18～24h培养。将普通絮状物或沉淀(除配方中使用不溶物质的培养基外)。营养琼脂平板与分离培养基平板相比较，观察质控菌1．3硬度符合试验所需培养基的硬度要求。如用的生长情况、颜色特征，以及菌落数量与大小两者有无于分离划线时，培养基不被划破。差异。几种主要分离培养基质控使用标准菌株及培养基质控指标(表1)。2培养基生物学指标要求及控制方法2．1选择性培养基表1几种主要分离培养基使用标准菌株培养的质控指标2．1．1目标菌接种：对于选择性增菌培养基通过增菌效果测定来鉴定增菌培养基的灵敏度。将质控目标菌接种于普通肉汤培养基中

5、，置37℃，18～24h培养，以无菌操作将肉汤培养物用生理盐水作10倍稀释10一到10一；将10倍稀释的质控目标菌悬液，从10到1O～，分别取0．1ml加入1支增菌培养基内，同时取10～、10各取0．1ml涂布平板各2块，置37℃，18～24h培养，做菌落计数，推算出10至100．1ml中所含的菌落数。取质控干扰菌未稀释肉汤培养液0．1ml，分别加至增菌培养培养基内(每管0．1m1)，置37c《=，培养至规定时间后划相应平板。2．1．2结果观察与记录：(++++)目标菌几乎为纯作者单位：418200，湖南省洪江市疾病预防控制中心首都

6、公共卫生2014年8月第8卷第4期CapitalJournalofPublicHealth，Aug．2014Vo1．8No．42．3生化鉴定培养基生化培养基配制后，必需接种3．4对开封过久的产品每半年一次，应进行培养基性具有典型特征、代表性的阴(阳)性质控菌株培养至规能核查，记录培养基开启日期、质量控制核查日期。定的时间，观察质控菌是否符合生化培养基中所应有3．5培养基配制时应详细填写《培养基配制记录的生物学特征性反应。同时作无菌对照试验。三糖铁表》，内容包括：配制日期和配制人员的标识、培养基培养基中标准菌株的典型生物学特征性反应(

7、表2)。名称及批号、pH、灭菌温度与压力、时间等。生化鉴定培养基中标准菌株的典型生物学特征性反应3．6对于使用量大、使用频率高或长期使用的培养(表3)。基，在初次使用前要进行质控检验，以后应定期进行质控检验。表2三糖铁培养基中标准菌株生物学特征性反应4小结作为微生物检验的基础，培养基的质量好坏将直接影响到检测工作的准确性和可靠性，所以提高培养基的质量控制，加强培养基的质控能力，才能为微生物表3生化鉴定培养基中标准菌株的典型生物学特征性反应检测提供优质可靠的数据。为确保微生物检测结果的准确性，应按以下要求做好培养基质控工作：①每种培养

8、基都要测试其支持、鉴别或抑制适当菌的能力；②对完全培养基可根据实验室情况选用不同类型的代表种；对选择、鉴别培养基应选择最能显示其特征的微生物，具体的选择应根据具体实验室条件来定；微生物应用ATCC菌种；③只有培养基其pH在正确的范围内