不同消化时间对原代心肌细胞的影响.pdf

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1、·564·医学研究生学报2015年6月第28卷第6期JMedPostgra，Vo1．28，No．6J旦，论著(基础研究)不同消化时间对原代心肌细胞的影响屈双丽，杨晓敏[摘要】目的原代心肌细胞培养是一项重要的体外实验技术，为建造心血管疾病相关模型提供了重要的基础保障。文中旨在通过探讨不同消化时间对原代心肌细胞培养的影响，得到一套简便易行并且能获得较高成活率、纯度及活性的原代心肌细胞的培养方法。方法采用单消化酶多次消化心肌组织，根据消化时间分为8min组和10min组，差速贴壁法和5一溴_2一脱氧尿苷抑制法获得纯度较高的心肌细胞。光学显微镜下观察心肌细胞形态，记录镜下不同区域心肌细胞

2、搏动频率测定细胞活力。用台盼蓝染色法检测培养细胞的存活率，横纹肌肌动蛋白鉴定心肌细胞。最后建立心肌细胞肥大模型，比较实验组(血管紧张素11)和对照组[10％FBSDMEM(H)培养基]的细胞截面平均面积。结果与8rain组比较，10min组原代心肌细胞大部分伸出伪足相互接触交织成网，逐渐形成细胞簇，立体感明显，细胞搏动及收缩更为明显而有力。分离纯化后原代心肌细胞的平均存活率均>90％，10min组平均存活率显著高于8min组[(95．4±0．8)％(93．0±0．8)％，P<0．05]。Ot—actin免疫细胞化学染色鉴定，8min组和10min组原代心肌细胞的阳性率均>95％。

3、血管紧张素Ⅱ作用48h后，10min组原代心肌细胞实验组心房钠尿肽(atrialnatriureticpeptide，ANP)、细胞截面平均面积较对照组表达均显著升高[(20．8±0．7)郴(15．8±0．5)，(34．77±8．43)m瑚(14．11±4．29)Ixm，P<0．05]，而消化时间为8min的原心肌细胞截面平均面积和ANP值未见显著变化。结论采用消化时间为8min的原代心肌细胞培养方法具有简便、省时、易操作等特点，最重要的是能够获得较高质量的心肌细胞。[关键词】原代细胞培养；心肌细胞；消化温度；消化酶；消化时间【中图分类号]R329[文献标志码】A[文章编号]10

4、08—8199(2015)06-0564-05InfluenceofdigestiontimeontheprimarycultureofcardimyocytesQUShuang．1．．i，YANGXiao．min(1．GraguateCollege，BaotouMedicalCollege，Baotou014030，NeiMenggol，China；2．DepartmentofCardiolo-gY，theSecondAffiliatedHospital，BaotouMedicalCollege，Baotou014030，NeiMenggol，China)[Abstract]O

5、bjectivePrimarymyocardialcellculture，asanimportanttechniqueforinvitroexperiment，providesanessen-tialbasisfortheestablishmentofmodelsofcardiovasculardiseases．Thisstudyaimedtoinvestigatetheinfluenceofdigestiontimeonprimarymyocardialcellcultureandtofindsomesimpleprimaryculturemethodsforobtaining

6、myocardialcellswithhighsurvivalrate，purity，andactivity．MethodsWeusedonlyonecollagenaseforrepeateddigestionofmyocardialtissuefor8and10minutes，re—spectively，andobtainedhigh—puritycardiomyocytesbydifferentialadhesionandBrduinhibition．Weobservedthemorphologicalchan—gesofthecardiomyocytesundertheo

7、pticalmicroscope，measuredtheirvitalityaccordingtothebeatingfrequencyindifferentregions，andcountedthelivingcellsaftertypanbluestaining．Finally，we基金项目：国家自然科学基金(81160033，81460068)；内蒙古establishedamodelofmyocytehypertrophyforverificationofcell自治区自