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《蟾毒灵抑制血管生成作用的初步观察.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、蟾毒灵抑制血管生成作用的初步观察作者：翟笑枫，吕祥，顾伟，宋长城，李柏【摘要】目的明确抗肿瘤中药提取物蟾毒灵有无抗血管生成的活性,并检测其量效关系。方法采用MTT法测定蟾毒灵对人脐静脉内皮细胞ECV304生长的抑制作用，计算IC50,观察其量效、时效关系;并以鸡胚绒毛尿囊膜为模型观察蟾毒灵在体内组织器官水平对血管生成的影响。结果蟾毒灵对ECV304细胞的生长有抑制作用，且呈浓度和吋间的依赖性。24、48、72hIC50分别为1.104、0.355、0.0905?g/mLo鸡胚绒毛尿囊膜实验表明蟾毒灵可显著
2、抑制血管生成的作用，并呈浓度依赖性。结论蟾毒灵具有明确的抑制血管内皮细胞增殖、抗血管生成的作用。【关键词】蟾毒灵;抗血管生成;血管内皮细胞;鸡胚绒毛尿囊膜Abstract：ObjectiveToobservetheanti-angiogenesisactivityofbufalinandfindthebestreasonableconcentrationforfurtherclinicaluse・MethodTheinhibitoryeffectofbufalinonECV304cellsindiffer
3、enttimesandconcentrationswastestedbyMTTmethod,itsconcentration-effectandtime-effectrelationshipwasanalyzedandtheirIC50wascalculated・Theanti~angiogensiseffectinvivowastestedbythemethodofchorioallantoicmembrane(CAM).ResultBufalinhadinhibitiongrowtheffectonE
4、CV304cellswithdifferentlevel,andhadconcentrationandtimedependence・TheIC50of24,48,72hwere1.104,0.355,0.0905?g/mLrespectively.IntestofCAM,differentconcentrationsofbufalincouldinhibittheangiogenesisofCAM(P&It;0.01)withconcentrationdependency・ConclusionBufali
5、ncaninhibittheproliferationofvascularendothelialcellandhasanti-a.ngiogenesiseffect・Keywords:bufalin;anti—angiogenesis;vascularendothelialcell;chorioallantoicmembrane血管生成是恶性肿瘤生长、侵袭和转移过程中必不可少的环节，而抗血管生成作为一种新的抗肿瘤治疗手段日益受到重视。蟾赊是我国传统的中药材,很早就有蟾赊全虫或蟾酥内服及外用治疗癥瘟积聚、痰
6、注、恶疮等类似肿瘤疾病的记载。蟾毒灵(Bufalin,二梵蟾毒二烯酸内脂)是从中药蟾酥中提取的一种毒性配基之一，现代研究显示,蟾毒灵在体外对人白血病、胃癌及肝癌细胞生长均有一定的抑制作用[1-4],我们的前期研究也发现蟾毒灵是蟾赊屮体外抗肝癌药理活性最强的单体之一[5]o但有关蟾毒灵抗血管生成作用的研究却鲜有报道,本研究观察其对人脐静脉内皮细胞ECV304牛长的影响,并观察了蟾毒灵对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)新生血管形成的影响。现报道如下。1实验材料DMEM培养基、10%胎牛血清、1：250胰蛋白酶等为美国
7、Gibco公司产品,HEPES缓冲液为德国Merck公司产品，四甲基偶氮哩盐(MTT)、蟾毒灵为Sigma公司产品。人脐静脉内皮细胞株ECV304细胞购自中国科学院海细胞生物研究所，白皮受精鸡蛋购自上海太平洋家禽有限公司。MIQAS医学图像定量分析软件由上海中腾信息技术有限公司提供。2实验方法2.1人脐静脉内皮细胞ECV304的培养细胞解冻后于含10%胎牛血清的DMEM培养液,37°C、5%C02、饱和湿度培养箱内培养，取指数生长期细胞用于实验。2.2对体外培养ECV304细胞生长活性的影响ECV304细
8、胞以5X104/孔接种，10%小牛血清的DMEM培养液,37°C、5%C02培养至融合状态，换成无血清培养液培养24h后，加入不同浓度蟾毒灵(分别为3.8X10—5、3.8X10-4、3.8X10-3、3.8Xio-2、0.38.3.8?g/mL);阴性组为不加药物处理的细胞悬液;空白组为无细胞及药物的培养液。作用24、48、72h3个时间点采用MTT法检测细胞生长抑制率。抑制率(IR%)=[(对照组0D值-实验组0D值)/对
