_氧化代谢障碍方法的建立及其临床应用研究.pdf

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1、宁夏医科大学学报第33卷10期·904·JournalofNingxiaMedicalUniversity2011年10月文章编号:1674－6309(2011)10－0904－05·论著·细胞学结合串联质谱诊断线粒体脂肪酸β－氧化代谢障碍方法的建立及其临床应用研究112133李红，张学红，刘丽，杨亚龙，小林弘典，山口清次(1．宁夏医科大学总医院儿科，银川750004;2．宁夏医科大学，银川750004;3．日本岛根大学医学部小儿科，日本6938501)摘要:目的建立应用成纤维细胞体外培养结合串联质谱酰基肉碱谱分析的诊断方法，诊断并鉴别不同的遗传性线粒体脂肪酸β－氧化代谢障碍病。方法

2、取健康对照标本6例和已确诊的遗传性线粒体脂肪酸β－氧化代谢障碍病患儿标本14例，包括SCAD(n=1)、MCAD(n=3)、VLCAD(n=3)、CPT－II(n=2)、MTP(n=2)、MCD(n=2)和CACT(n=1)等酶的缺陷共7种病症。以棕榈酸(C16酸)为培养溶媒底物，成纤维细胞株37℃持续培养96h后，应用串联质谱分析相应培养液中的酰基肉碱谱并计算比较相应结果，行诊断和鉴别诊断。结果所有病人的C2均显著低于对照组，其它酰基肉碱的浓度在不同病种的表现各不相同，SCADD呈现C4异常增高;MCADD显示C8的特异性增高;VLCADD则以C12的异常增高为特征;CPTD－II

3、表现为C16异常增高同时C2显著减低;MAD缺陷的特点是从C4到C12大范围的异常增高;MTPD则表现C12和C16的同时增高;CACTD类似于CPTD－II呈现C16增高而C2降低，但异常的幅度较CPTD－II小。此外，计算比较各酰基肉碱与乙酰肉碱的比值(Cn/C2)在不同病症亦呈现出特异性结果。结论应用成纤维细胞体外特定条件培养结合串联质谱酰基肉碱谱分析，可诊断和鉴别诊断各种遗传性线粒体脂肪酸β－氧化代谢障碍病，是一个较为简便特异的方法。关键词:线粒体脂肪酸β－氧化代谢障碍症;成纤维细胞;串联质谱;酰基肉碱;诊断中图分类号:R589文献标识码:A遗传性线粒体脂肪酸氧化代谢障碍症(

4、fatty应用。acidβ－oxidationdisorder，FAOD)是由于脂肪酸进1材料与方法入线粒体的途径或脂肪酸在β－氧化螺旋过程中1．1皮肤成纤维细胞标本相应标本采集均经过因所需酶类的缺乏或功能障碍而导致的脂肪酸氧医学伦理委员会的批准，符合相关规定。化受阻，从而导致的一组因毒性中间产物堆积或能1．1．1健康对照(Control，CON)6例(细胞株3［1］量供应不足的代谢性疾病。脂肪酸β－氧化是代到14代)，来自于健康志愿者。人体在空腹、剧烈运动或各种压力下的主要能量来1．1．2FAOD病例14例(细胞株3代到12代)，［2］源，重点供应包括心、脑、肝、肌肉等脏器所需。来

5、自于2000年至2009年间日本岛根大学小儿科近年来研究已发现了20余种参与脂肪酸β－氧化遗传代谢病研究室确诊的FAOD患儿。所有病例过程的活性酶，相应酶的活性缺陷导致临床一系列均经过气相色谱质谱联用(gaschromatographyand［3－4］FAOD。针对遗传性线粒体FAOD的诊断，国massspectrometry，GC/MS)和(或)串联质谱联用外学者进行了串联质谱分析筛查结合体外细胞学(tandemMS，MS/MS)分析、相关酶活性测定和［5－7］方法的研究，而国内尚鲜有相关报告。本文(或)基因缺陷定位等得以明确诊断。其中包括1旨在探讨FAOD的体外细胞学结合串联质谱

6、分析例短链酰基辅酶A脱氢酶(short－chainacyl－CoA诊断方法的建立及其在临床诊断和鉴别诊断中的dehydrogenase，SCAD)障碍症;3例中链酰基辅酶A脱氢酶(medium－chainacyl－CoAdehydrogen-收稿日期:2011－04－20ase，MCAD)障碍症;3例极长链酰基辅酶A脱氢基金项目:宁夏科技攻关项目(2011年第一批);宁夏医科大学特酶(very－long－chainacyl－CoAdehydrogenase，殊人才基金项目(XT201008)VLCAD)障碍症;各2例肉碱棕榈酰转移酶II作者简介:李红，女，主任医师，硕士研究生导师，博

7、士，主要从事小(carnitinepalmitoyltransferaseII，CPT－II)、线粒体儿遗传代谢病及其相关疾病的发病机制及临床诊治研究。E－mail:nxlihong@163．com三功能蛋白(mitochondrialtrifunctionalprotein，10期李红，等.细胞学结合串联质谱诊断线粒体脂肪酸β－氧化代谢障碍方法的建立及其临床应用研究·905·MTP)、复合酰基辅酶A羧化酶(multipleacyl－CoA甲醇中)，充分混