资源描述：
《滤纸干血-新生儿促甲状腺素酶联免疫分析试剂盒的研制.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第16卷第2期同 位 素Vol.16No.22003年5月JournalofIsotopesMay2003滤纸干血-新生儿促甲状腺素酶联免疫分析试剂盒的研制1111官国英,王晶晶,韩世泉,于 洁,111222王玉肖,刘一兵,李丽波,陈志东,张彬彬,傅宝国(1.中国原子能科学研究院同位素研究所,北京 102413;2.辽宁省黑山县地方病防治所,辽宁黑山 121400)摘要:以辣根过氧化物酶标记链亲合素(SA),两株识别人促甲状腺素(hTSH)高度特异的单克隆抗体分别用于包被微孔和生物素化,以四甲基联苯胺(TMB)为底物,建立了滤纸干血2
2、新生儿促甲状腺素生物素2亲合素酶联免疫分析(NeonatalTSH2BA2ELISA)试剂盒的制备方法。本方法的灵敏度为0.5mIUöL,批内变异系数<15%,批间变异系数<20%,回收率为90.1%～103.3%。本方法所制备的试剂盒与NeonatalTSH2IR2MA(磁颗粒法)试剂盒具有良好的相关性,相关方程为y=1.01x+0.34,相关系数为r=0.873。本试剂盒无放射性,操作简便、快速,适用于临床检测和科研应用。关键词:生物素2亲合素系统(BAS);酶联免疫分析(ELISA);滤纸干血2新生儿促甲状腺素(Neonatal
3、TSH)中图分类号:R446161文献标识码:A文章编号:100027512(2003)0220092204 血清TSH水平是诊断原发性甲状腺机能减用血滴纸片法检测新生儿脐带血或足跟血最常退的可靠、灵敏、特异性指标。纸片法TSH主要用的方法是免疫放射测定法(IRMA),但该法具用于新生儿(Neonatal)先天性甲状腺机能减退有放射性,标记物放射性半衰期较短,且对检测的筛选。先天性甲状腺机能减退是造成低智儿的仪器要求较高。本工作拟建立一种非放射性检测[1]重要原因之一,居先天性代谢病发病率之首。系统——生物素2亲合素酶联免疫分析(B
4、AS2用TSH进行早期诊断,在小儿未发生临床症状ELISA),以克服IRMA的不足之处。之前,就予以足量的甲状腺制剂或合成的甲状腺素片进行替代治疗,即可完全阻断小儿生长发育1 材料和方法障碍和不可逆智力低下。另外,在缺碘地区开展111 试剂和仪器新生儿筛查能够直接反应该地区碘缺乏的程度包被用抗TSH单克隆抗体:中国原子能科以及碘缺乏病的消长趋势,是监测碘缺乏病的一学研究院同位素研究所生产;生物素化抗TSH个特异性指标。单克隆抗体:购自芬兰;TSH抗原、生物素化试微量TSH测定是判断下丘脑2垂体2甲状腺剂、四甲基联苯胺(TMB)、脲素过
5、氧化氢、链亲轴相互关系和正确评价他们功能状态的指标之合素化酶:均为美国Sigma公司产品;96孔酶标一,尤其是对先天性甲状腺功能减退的诊断具有板为美国Cost公司产品;Spectra酶标仪:奥地[1]独特意义,并对临床治疗具有指导作用。目前利SLT公司产品;NeonatalTSH2IRMA(磁颗粒收稿日期:2003203225;修回日期:2003204210作者简介:官国英(1969～),女(汉族),四川威远人,工程师,放射化学专业 第2期 官国英等:滤纸干血2新生儿促甲状腺素酶联免疫分析试剂盒的研制93法)试剂盒:中国原子
6、能科学研究院同位素研究2 结果与分析所产品;临床样品:滤纸干血纸片(脐带血):辽宁2.1 抗体包被浓度的选择省黑山县地方病防治所提供。用pH=9.6的Na2CO32NaHCO3缓冲液将1.2 实验方法TSH包被抗体配制成0.5、0.8、1.0、1.2、1.6、[2,3]1.2.1抗TSH单克隆抗体的生物素化 将2.0、2.5、3.3、5.0、1010mgöL工作液包被微孔,已纯化好的抗TSH单克隆抗体(McAb)用0.1结果示于图1。由图1可知,包被浓度为2.0mgömolöL的NaHCO3配成TSH浓度为1göL的L即可达到要求。溶
7、液,在1mL抗体溶液中加入20LL溶于二甲2.2NeonatalTSH-BA-ELISA和Neonatal基甲酰胺浓度为20göL的生物素2N2羟基丁二TSH-ELISA的比较酰亚胺酯(BNHS)溶液,混匀,室温反应1.0h,采用NeonatalTSH2BA2ELISA与HRPO于4℃用0.05molöLpH=7.2的磷酸盐缓冲标记TSH抗体即NeonatalTSH2ELISA两种实液(PBS)透析过夜,然后加入等体积甘油,-20验方案的标准曲线示于图2。图2显示Neonatal℃贮存备用。TSH2BA2ELISA系统灵敏度高于Neo
8、natal1.2.2 固相抗体的制备 向聚苯乙烯微量滴定TSH2ELISA,更适合用作滤纸干血2新生儿促甲板孔中加入含有TSH包被单克隆抗体的pH=状腺素酶联免疫分析。9.6的碳酸盐缓冲液,每孔100LL,置4℃冰箱内过
