羧甲基壳聚糖对肿瘤生长的影响研究.pdf

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1、第4l卷第9期2011年9月中国海洋大学学报PERl0DlCAL0F0CEANUNIVERSITY0FCHINA41(9)：036～040Sep．，20ll羧甲基壳聚糖对肿瘤生长的影响研究’刘万顺1，郑美玲1，韩宝芹1，亢寿海2，李南1(1．中国海洋大学海洋生命学院，山东青岛266003；2．江苏省肿瘤研究所，江苏南京210008)摘要：研究评价了不同分子量及不同取代度的3种羧甲基壳聚糖(cMcTs)对肿瘤生长的影响。用M兀、比色法测定3种CM—CTS对人正常肝细胞L02及3株肿瘤细胞：Bel_

2、7402、S(；C-7901及Hela生长的影响；ELISA方法检测3种CM—CTS对2种肝细胞L02及Bel一7402分泌TG卜a及ⅥⅪF水平的影响；建立小鼠移植性肿瘤Heps模型，腹腔注射分子量最大的CM—I，研究cM—Crs的抑瘤作用。研究结果表明，分子量及取代度不同的3种CM一(、TS在O．05～O．8mg／n1L浓度范围内，对L02细胞增殖具有显著促进作用，对Bel一7402、SoC-7901及Hela细胞的增殖则具有一定的抑制作用；3种CMJ：Ts能提高L02细胞1、GF-a分泌水平

3、，抑制Bel一7402细胞分泌TGpa及VEGF水平；在动物水平上，CMCTS能抑制小鼠Heps肿瘤生长，且量效关系显著。说明不同分子量及取代度的3种羧甲基壳聚糖对肿瘤生长具一定的抑制作用。关键词：羧甲基壳聚糖；肿瘤；细胞因子中图法分类号：[q1539+．7]；R735．7文献标志码：A文章编号：1672—5174(2011)09一036一05羧甲基壳聚糖(carboxymethylchitosan，CM—CTs)是壳聚糖改性研究和应用研究最多的1种壳聚糖衍生物，具有良好的水溶性、优良的成膜性和

4、保湿性等，在日化、食品、医药及医用生物材料等领域中具有广泛的应用前景[1]。CM—CTS作为生物医用材料在烧伤敷料、防术后黏连材料、药物载体及酶抑制剂等领域中研究较多[2

5、。CM—CTS含有一NH。和一C00H，其分子量和羧基取代度不同，使生物学活性存在较大差异。细胞水平的研究证明，CM-CTS具有促进正常细胞生长的作用[3]，而其对肿瘤细胞生长的影响则报道较少，故开展CM-CTS对肿瘤生长的影响具有重要的理论意义和实际意义。本实验旨在研究不同分子量及不同羧化度的CM—CTS对人正常肝细胞L02

6、及3株肿瘤细胞：Bel—7402、SC￡一7901及Hela体外增殖及相关细胞生长因子分泌水平的影响，以及对Heps小鼠肿瘤生长的影响，为CM-CTS在生物医用材料领域的应用提供实验数据。1材料与方法1．1材料3种CM_CTS样品均由本实验室制备，分别标记为CM_I、CM一Ⅱ及CM-Ⅲ。人正常肝细胞L02及人肝癌细胞Bel．7402购自中国海洋大学药物研究所；人胃癌细胞sGC_7901及人宫颈癌细胞Hela由中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所提供。4种细胞均于含10％新生牛血

7、清的RPMll640培养基中常规培养，o．25％胰酶消化传代；昆明种小鼠，雌雄各半，体质量(20±1)g，由南京安立默实验动物繁殖中心提供。Heps荷瘤小鼠购自北京鼎国生物科技有限公司。1．2试剂与仪器RPMll640培养基(Gibco)，新生牛血清(Hy—clone)，胰蛋白酶和MTT(Sigma)，人TGF-。【和VEGFELISA试剂盒(上海劲马实验设备有限公司)，其它试剂均为国产分析纯。真空冷冻干燥机(Labconco)，高效液相色谱仪(美国waters)，倒置显微镜(日本01ympus

8、)，超净工作台、BBl6FC02培养箱(上海力申科学仪器有限公司)，Ray—t02100C酶标仪(深圳雷杜生命科学有限公司)。1．3实验方法1．3．1材料纯化及性质研究CM—I、CM一Ⅱ及CM一Ⅲ样品于三蒸水中溶解透析，经o．22脚滤膜过滤，真空冷冻干燥。GPC—HPI￡测定样品分子量，流动相：O．02MPBS溶液；流速：O．8mL／min；柱温：35℃；示差检测器；右旋糖苷标样。采用电位滴定法测定羧基取代度L4j。1．3．2体外细胞增殖实验取对数生长期L02、Bel-7402、SGC-790l

9、及Hela细胞，胰酶消化后，调整细胞浓度为3×104／mL，接种于96孑L板，每孔200肛L。实验设不同浓度CM—CTS实验组，细胞对照组及空白对·基金项目：国家高技术研究发展计划重点项目(2007AA091603)资助收稿日期：2011一01—17；修订日期：20ll—04一18作者简介：刘万顺(1950一)，男，博导，从事生物化学与海洋生物材料研究。E-nmil：WanshunLiu@hotmail．㈣9期刘万顺，等：羧甲基壳聚糖对肿瘤生长的影响研究照组。常规培养24h待细胞贴壁生长良好时，