利用SSR标记分析一年生黑麦草遗传多样性的取样策略_罗.pdf

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1、３７６－３８２草业科学３０卷０３期０３／２０１３ＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＬＳＣＩＥＮＣＥＶｏｌ．３０，Ｎｏ．０３櫧櫧櫧櫧毥毥櫧利用ＳＳＲ标记分析一年生黑麦草遗传櫧植物櫧櫧櫧櫧毥生产层毥櫧櫧櫧櫧多样性的取样策略罗永聪，马啸，张新全（四川农业大学草业科学系，四川雅安６２５０１４）摘要：一年生黑麦草（Ｌｏｌｉｕｍｍｕｌｔｉｆｌｏｒｕｍ）为异花授粉植物，其ＤＮＡ多态性研究的取样策略与遗传多样性分析的可靠性和效率直接相关。从一年生黑麦草国家审定品种“长江２号”和“特高”中，分别提取５０个单株ＤＮＡ，同时提取５、１０、１５、２０、２５和３０个单株叶片混合样本的ＤＮＡ，利用ＳＳＲ标记进行遗传多态性分析。

2、研究结果表明，取样梯度间多态性信息含量指数（ＰＩＣ）差异不显著（Ｐ＞０．０５），但当混合单株样本为２０株时，ＰＩＣ达到最高值；ＳＳＲ平均等位基因数和单个ＳＳＲ座位上等位基因种类随样品内单株混合数目增加而增加，当取样量在２０株及以上时，等位基因数和等位基因种类趋于稳定，电泳图谱表现基本一致；不考虑稀有等位基因（基因频率≤１０％）的漏检，采用２０株混合样本能够最大限度保持检出较高频率（＞１０％）等位基因，且重演性较好。鉴于此，利用ＳＳＲ标记分析一年生黑麦草遗传多样性时采用２０个单株混合样提取的ＤＮＡ样本能够有效反映群体间差异。关键词：一年生黑麦草；ＳＳＲ标记；遗传多样性；混合样本；取样策略中图

3、分类号：Ｓ５４３＋．６０３；Ｑ９４３文献标识码：Ａ文章编号：１００１－０６２９（２０１３）０３－０３７６－０７①［５－６］一年生黑麦草（Ｌｏｌｉｕｍｍｕｌｔｉｆｌｏｒｕｍ）又名意大（Ｐａｓｐａｌｕｍｖａｇｉｎａｔｕｍ）各为２０株，而多年生黑［７］利黑麦草、多花黑麦草，是具世界栽培意义的禾本科麦草（Ｌ．ｐｅｒｅｎｎｅ）为３０株，对白三叶（Ｔ．ｒｅｐｅｎｓ）牧草，具有产量高和品质好的优点，被广泛用于建植品种群体的ＡＦＬＰ分析发现，随机选取品种内的２０［１］人工草地、割草地和放牧地。一年生黑麦草栽培个单株混合提取的ＤＮＡ样本可有效地分析品种间品种多为人工选育的同源四倍体（２ｎ＝４ｘ＝２８），加的

4、遗传关系，并且同一品种群体内单株具有的９０％之以异花授粉的繁育特性，造成其种质资源遗传结的条带会在混合样本中重现，丢失的条带都是一些［２］［８］构复杂，品种遗传基础表现出相当大的异质性，即稀有条带。ＳＳＲ（ＳｉｍｐｌｅＳｅｑｕｅｎｃｅＲｅｐｅａｔｓ）又名品种中的个体间存在较大的遗传变异。在分析异质微卫星（Ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ），是一类具有高度多态性的杂合植物群体间和群体内变异时，一般对品种和生分子标记，目前已广泛应用于植物遗传育种研［９－１１］态型群体进行个体取样分析，而最佳的群体取样数究。在用ＳＳＲ进行遗传多样性或品种指纹鉴定量主要取决于最小的共享等位基因或基因型的频分析时首先考

5、虑的是样本数量问题，采集的样本数［１２］率。例如，要分析不小于１０％的等位基因频率，群量应该能代表某一群体的总体遗传多样性水平。体取样量为４０株左右，而分析不小于５％的等位基目前国内尚未见利用ＳＳＲ标记分析一年生黑麦草［３］因频率，群体取样量为１００株左右。为了分析更遗传多样性的取样策略的研究报道，本研究以两个多的基因型，混合单株策略成为一种常见的方法，它一年生黑麦草国家审定品种为材料，通过对不同混在分析扫描基因库种质资源的遗传多样性或进行品合单株梯度下样本间遗传多样性的差异分析，探讨种鉴定及种子批纯度鉴定时发挥了重要作用。利用进行一年生黑麦草遗传多样性分析时的科学取样策ＲＡＰＤ标记分析一

6、些常见异交牧草和草坪草品种略。群体的最佳混合样本量，苜蓿（Ｍｅｄｉｃａｇｏｓａｔｉｖａ）为１材料与方法［４］７株，红三叶（Ｔｒｉｆｏｌｉｕｍｐｒａｔｅｎｓｅ）和海滨雀稗１．１试验材料以“长江２号”和“特高”两个一年①收稿日期：２０１２－０６－２７接受日期：２０１２－０８－２３基金项目：国家科技支撑计划项目（２０１１ＢＡＤ１７Ｂ０３）；国家现代牧草产业技术体系（ＣＡＲＳ－３５）作者简介：罗永聪（１９８８－），女，四川绵阳人，在读硕士生，研究方向为草种质资源创新与育种。Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｙｃ２５２９＠１６３．ｃｏｍ通信作者：张新全（１９６５－），男，四川雅安人，教授，博士，研究方向为草种质资源创

7、新与育种。Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｈａｎｇｘｑ＠ｓｉｃａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ０３／２０１３草业科学（第３０卷０３期）３７７生黑麦草品种为材料，分别从两个群体中提取５０个稀释至１０ｎｇ·μＬ－１，放于４℃冰箱保存备用。单株ＤＮＡ，同时提取５、１０、１５、２０、２５和３０个单株１．２．２扩增反应和变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测叶片等质量混合后样本的ＤＮＡ，混合样本中的单株ＰＣＲ扩增反应总体积为２０μＬ，其中ＰＣＲ－Ｍｉｘ１０取自单株样本。其