双黄连对犬肝细胞对乙酰氨基酚损伤的保护作用.pdf

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1、单位代码：学号：!QQ墨鱼2QQ墨垒鱼窆肝细胞对乙酰氨基酚损伤的保护作用ProtectiveEffectofShuanghuanglianonAcetaminoohen．．IniuriedCanineHepatocytesAcetaminoIiurieclanineepatocytes-学位申请人：侯聪敏指导教师：马玉忠教授学科专业：临床兽医学学位类别：农学硕士授予单位：河北农业大学答辩日期：二。一一年五月十四日独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研

2、究成果，也不包含为获得逦j丝壅些太堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：侵砸缦签字日期：争∥，／年6月。J日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解塑j匕壅些太堂有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权洹j竖壅些太堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：侄i礴钮签字日期：弘t，

3、年6月上日学位论文作者毕业后去向：工作单位：通讯地址：导师签名：签字日期：电话：邮编：摘要双黄连由金银花、黄芩、连翘3味中药组成，具有清热解毒、辛凉解表等功效。药物进入动物机体后，要在酶的参与下进行分解、代谢。参与药物代谢的酶主要是细胞色素P450酶系，它主要存在于肝脏的微粒体中。目的：建立分离及培养犬原代肝细胞的方法，并通过体外实验探讨双黄连及各单味药物相互作用的分子机理以及其对肝损伤的保护作用，为临床合理用药提供理论依据。方法：通过胶原酶两步灌流法获取犬肝细胞，用含多种辅助因子的Williams’E培养基进行培养，每天观察肝细胞的生长情况，并进行图像采集。同时用对乙酰氨基酚

4、(AP)来制备肝细胞损伤模型，收集不同时段细胞培养上清液，MTT法测定肝细胞的存活率，分光光度法测定细胞培养液中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、丙二醛(MDA)及乳酸脱氢酶(LDH)的含量，用不同浓度的双黄连及各单味药处理损伤的犬肝细胞24-48h，Westen-blot法检测犬肝细胞中CYP450的表达。结果：通过胶原酶两步灌流法，每只犬可获得肝细胞7．2X109个，用台盼蓝排除法检测到6．81×109个活细胞，成活率高达94．6％。培养的肝细胞形态完整、生长良好，可用于药物代谢的研究。16mMAP是致体外培养肝细胞损伤的最适浓度。不同浓度的双黄连处理损伤的犬肝细

5、胞后，作用24h时CYP450的表达呈升高趋势，但在药物浓度达到25mM的时候CYP450的表达呈降低趋势；48h时CYP450的表达随双黄连浓度的增加而呈降低趋势，lmM、2mM与5mM组对CYP450的保护作用明显增强。由此可知，1-5mM的双黄连为最佳作用剂量。将不同浓度的金银花、黄芩、连翘分别作用于犬肝损伤细胞，结果发现，CYP450的表达不理想，不如双黄连作用后所表达的有规律。结论：双黄连能明显减轻AP所致犬急性肝细胞损伤，对肝损伤具有一定的保护作用。关键词：双黄连；犬；原代肝细胞；损伤；保护作用ProtectiveEffectofShuanghuangJian011

6、Acetaminophen-InjuriedCanineHepatocytesMastercandidate：CongminHouAdvisor：．Prof．YuzhongMaMajor：．ClinicalVeterinaryMedicineAbstractShuanghuanglianpreparationiscomposedbyhoneysuckble,baicalskullcaprootandforsythiasuspense，withtheefficacyofheat—clearinganddetoxicating,acrid-coldherbsrelievingsup

7、erficies．Thedrugmetabolismwasinvolvedbyenzymes．Themainenzymewithdrugmetabolismwasc”odlromeP450system，whichlocatedinhepaticmicrosome．Objective：Establishamethodforisolationandcultivationofprimaryculturedcaninehepatocytes，explorethemolecularmechanismo