AtEFS1基因在拟南芥开花调控途径中的功能分析.pdf

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1、分类号：Q垒!墨±QZ墨密级：公珏单位代码：学号：100862008047AtEFSl基因在拟南芥开花调控途径中的功能分析FunctionalAnalysisofAtEFSIGenewithRegulationofFloweringPathwaysinArabidopsisthaliana学位申请人：张靖指导教师：董金皋教授学科专业：植物学学位类别：理学硕士授予单位：河北农业大学答辩日期：二。一一年五月二十九日独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他

2、人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得塑韭盔些盘堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解塑皇垦盎些盘堂有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权塑兰垦盔些盘堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：

3、导师签名：签字日期：年月日签字日期：年月日学位论文作者毕业后去向：工作单位：通讯地址：电话：邮编：摘要研究植物开花时间调控的分子机制对于调节植物繁殖和发育、提高作物产量和品质具有重大的意义。实验室前期研究从拟南芥T-DNA插入突变体库中筛选获得了一株早花突变体e居．J(earlyfloweringinshortmutant1)，通过GenomeWalking技术和生物信息学方法鉴定出一个新的拟南芥开花调控相关基因EFSl，通过互补回复和超表达试验，确定了EFSl基因为拟南芥开花调控基因，利用RT-PCR和Real．TimePCR技术，初步确定了EFSl基

4、因可能通过GA、春化和光周期途径调控拟南芥开花。为进一步明确EFSl基因在拟南芥开花调控途径中的功能，本试验利用反义RNA和RNAi技术，获得EFSl基因功能缺失突变体，验证了EFSl基因的功能；通过检测春化，赤霉素对花期和EFSJ基因表达的影响，初步确定EFSl基因参与的拟南芥开花调控途径；通过构建及获得并鉴定开花关键基因的超表达、T-DNA插入突变体，为进一步明确EFSl基因所参与的拟南芥开花调控途径及在途径中的位置奠定基础。1．春化和赤霉素处理拟南芥野生型、咖．J『突变体、回复及超表达突变体，通过分析春化和赤霉素处理对花期及EFSl基因表达的影响，

5、初步确定了EFSl基因主要通过光周期途径和赤霉素途径控制着植物的成花。2．构建了EFSl基因反义RNA和RNAi载体pCAMBIAl300．EFSlA和pCAMBIAl300．EFSli，经农杆菌介导转化拟南芥突变体咖．J，通过潮霉素筛选和PCR鉴定，获得了1I株RNAi转基因植株和10株反义RNA转基因植株。RT-PCR分析发现，转基因植株中EFSl基因的表达均受到不同程度的抑制，确定所得转基因植株均为EFSl基因的(反义RNA／RNAi)功能缺失突变体。对野生型和各种突变体植株的表型进行观察，进一步确定了EFSl基因缺失导致植株早花。3．构建了开花途

6、径中关键基因CO和FLC的超表达载体pCAMBIAl300．CO和pCAMBIAl300-FLC，经农杆菌介导转化拟南芥野生型C01．0。通过潮霉素筛选及PCR和RT-PCR鉴定，获得9株CO超表达转基因植株和8株FLC超表达转基因植株。4．从拟南芥SALK库中获得了拟南芥开花途径中关键基因GI,CO、三月KFVE及EFSl的ToDNA插入突变体(SALK一092757、CS870084、SALK一149287、SALK一027724(CS878321)和SAIL一122一H09)。利用PCR技术，获得了GI,CO、LHY、FVE及EFSI基因的纯合突变

7、体。5．构建了EFSl基因的酵母诱饵表达载体pASl．-EFS-CDS，为进一步筛选EFSl的互作蛋白奠定基础。关键词：拟南芥；早花；RNAi；RT-PCR；超表达FunctionalAnalysisofAtEFSlGenewithRegulationofFloweringPathwaysinArabidopsisthalianaAuthor：ZhangJingSupervisor：ProfessorDONGJin·gaoMajor：BotanyAbstractTllefloweringtransformationprocessinhigherplant

8、sisstrictlycontrolledbyboththeinherentre