拟南芥br调控蛋白pmrp的功能分析

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1、万方数据分类号Q坌堑：墨墨三密级：公珏单位代码：!QQ塞鱼学号：20l垃56拟南芥BR调控蛋白PMRP的功能分析FunctionalanalysisofBRregulatoI．yproteinsPMRP!InArnbidopSisthnliana学位申请人：指导教师：学科专业：学位类别：授予单位：答辩日期：由诗东王凤茹副教授董金皋教授植物学理学硕士河北农业大学二。一四年五月三十一日万方数据独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究二[作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不

2、包含l￡他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得塑兰堡垒些盘堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：怙勺尔签字R期：沙f午年g月弓同学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解塑兰垦盔些盘鲎有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权塑兰垦盔些盘堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。

3、(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者繇I匆毒勺致签字同期：Ⅵ】牛年6月了同学位论文作者毕业后去向：工作单位：通讯地址：导师签名：签字日期：沙f眵年6月弓同电话：邮编：万方数据摘要STAIH(the1ipid／sterol-bindingstAR-relatedlipidtransf酹proteindomains)保守结构域，是一种30Kda的可以结合和转运胆固醇到线粒体内膜的类固醇类调节蛋白，被定义为一个大约200个氨基酸序列，与脂类和{_}{醇类物质结合相关。拟南芥中含START结构域的蛋白质家族共有35个成员

4、，根据结构和大小分为7个亚家族，其中含HDZLZSTART结构域的21个，含PHSTAlHDUFl336结构域的5个，仅含START结构域的9个。含START结构域的蛋白质己确定功能的有9个，分别为GL2、ANL2、PDF2、ATMLl、FWA、PHV、PHB、ATHB一8、REV。上述已知功能的蛋白均为HDZLZSTART结构域蛋白亚家族，分别调控皮层的发育(ATMLl)、花器官形成(PDF2)、花青素积累(ANL2、FWA)、表皮毛生长(GL2)、近远轴极性(PHV、PHB、REV)、维管束建成(ATHB一8)的发育过程，

5、而其他含有STAl汀结构域的蛋白功能尚未有文献报道。为进一步分析STAIⅡ结构域的功能，我们选择其中比较保守的，仅含有STAl玎结构域的PMRP蛋白作为研究对象。为阐明尸!枷尸在植物生长发育过程中的作用，本研究对刷帜P基因的功能进行分析。获得以下主要结果：1．尸!枷尸受油菜素内酯(Brassinosteroids，BRs)诱导。本研究用100洲的2，4。表油菜素内酯(eBL)处理生长4周的Col—O拟南芥，处理时问分别为3、6、9、12、18、24h，ImPCR结果表明，随着eBL处理时间的延长，尸枷尸基因的表达量逐渐升高，表

6、明BR诱导P枷P基因的表达。2．户枷P的表达模式分析(1)构建刷脚妒启动子连接GUS报告基因的组织定位载体，对剧泖护的组织定位进行分析，发现剧帜P在整个幼苗均有表达，尤其在子叶和下胚轴中表达最多，在真叶中主要分布在叶脉和表皮毛发生部位，在根中的表达也很明显。(2)通过构建PMRP—GFP融合表达载体，并转化原生质体，对脚的亚细胞定位进行初步分析，发现尸枷P主要位于细胞膜上，在细胞质中也有表达。(3)利用Real．timePCR技术，对刷垣胛基因在拟南芥的时空表达情况进行分析，发现刷垣RP在茎生叶中的表达量最高，其次是莲座叶、茎

7、，而在根、花和种子中的表达量都较少。进一步的结果表明，刷汪RP基因在莲座叶、茎生叶、茎中的表达量随生长时间的增加而增加，而在根和整个地上部分中的表达基本处于一个比较稳定的状态。3．刷帜JP的生物学功能分析创制脚功能获得和缺失的转基因拟南芥，并对其表型进行分析，明确脚的生物学功能。(1)过表达脚的拟南芥叶片变大，根长变长；T-DNA插入突变体表现为矮小，突变体抽薹数少于野生型，且经常由一侧伸出主枝。表明刷脚泸对拟南芥的生长发育及极性建成过程中具有重要作用。(2)通过对叶片表皮细胞形态的观察发现，T-DNA插入突变体远轴面的细胞较

8、野生型紧凑，表现出近轴化的特征；过表达刷M即的转基因拟南芥叶片近轴面的细胞出现了远轴面细胞的形态特征。进一步证明纠坦RP对极性建成的调控作用。(3)通过对过表达户枷P的转基因拟南芥叶片中的花青素含量分析表明，过表达尸枷尸的转基因拟南芥叶片中花青素的含量万方数据明显高于野生型拟