生物工程综合训练报告-高娟娟.doc

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1、成绩大连民族学院生物工程综合训练报告题目：信号分子酰基高丝氨酸内酯的合成与检测完成人：高娟娟班级：生物工程094指导教师：赵晶设计日期：2012.1218目录实验任务书---------------------------------------3一、研究背景----------------------------------5二、实验研究内容------------------------------72.1菌种----------------------------------72.2培养基与培养条件-----------------------72.3

2、药品-----------------------------------82.4实验方法和步骤-------------------------82.5实验结果与分析—————————————11三、致谢--------------------------------------16四、参考文献-------------------------------------1718实验研究任务书一、研究课题：（题目）信号分子酰基高丝氨酸内酯的合成与检测二、应完成日期：2012年12月三、题目来源：教师校自主科研基金四、在校内或校外以何种形式进行或校外单位名称：校

3、内实验五、综合训练要求及内容：1.了解酰基高丝氨酸内酯的相关知识；2.合成酰基高丝氨酸内酯信号分子；3.检测合成的酰基高丝氨酸内酯信号分子。六、实验重点：1.合成酰基高丝氨酸内酯信号分子方法的选择；2.酰基高丝氨酸内酯信号分子检测方法的建立。18信号分子酰基高丝氨酸内酯的合成与检测研究报告摘要：AHL是一种小分子化合物，含有高丝氨酸内酯环和一个酰胺侧链，不同细菌可合成不同的AHL信号分子。N-酰基高丝氨酸内酯(N-acylhomoserinelactone,AHLs)作为细菌群体感应中的信号分子参与表达。N酰基高丝氨酸内酯酶(N-acylhomoserine

4、lactonelactonase,AHL-Lactonase)通过水解AHL生成酰基高丝氨酸，使AHL失去活性。关键词：N-酰基高丝氨酸内酯信号分子18一.研究背景长期以来，人们总是认为只有细胞生物才存在细胞间的信息交流，而细菌则被认为是以单个细胞的生存方式存在于环境中，直到20世纪90年代，人们才认识到细胞间信息交流不仅限于真核生物，也存在于原核生物。细菌之间可以通过一种小分子的信号分子进行交谈，细菌根据这些信号分子的浓度检测周围环境中自身或其他细菌的数量的变化，并通过信号分子发信号，同时启动菌体中相关基因的表达，改变和协调他们之间的行为，共同展示出他们的

5、某些生理特性，从而表现出单个细菌无法从事的某些生理功能和调节机制，这一调控系统被成为细菌的群体感应调节（QS）。不同菌体QS利用不同的信号分子调控基因的表达，革兰氏阴性细菌通常使用一种酯类化合物——酰基高丝氨酸内酯（AHL)作为QS信号分子感知自身数量。AHL是一种小分子化合物，含有高丝氨酸内酯环和一个酰胺侧链，不同细菌可合成不同的AHL信号分子，主要区别在于测链的长度或3--碳位置的取代基的不同或侧链有无一个或多个不饱和链。18革兰氏阴性菌AHL介导的QS系统是备受关注的。AHL与许多真核生物的激素分子具有相似的结构，并且研究指出细菌的AHL对真核细胞有明

6、显的生物学效应。反过来，真核生物的激素也可能会与细菌的QS系统中的某些组分发生相互作用，进而影响细菌的细胞反应。研究和了解这种物种间双向信息交流的信号分子对我们了解真核生物和原核生物的关系以及真核生物如何与有益或有害细菌共生共存并作出响应具有重要意义。本文将介绍如何合成AHL及AHL的检测。18二．实验研究内容2.1菌种2.1.1NT1NT1：农杆菌菌株控制traTi质粒并合成AA1蛋白，称NT1。2.1.2对照菌解淀粉芽孢杆菌；大肠杆菌2.1.3海洋菌种1.1.2；1.1.4；1.1.6；1.2.6；4.1.5；4.2.2；4.2.3（#2培养基）1.1.

7、1；4.2.2；4.2.3；8.4.1；8.4.5；8.4.6（通用培养基）2.2培养基和培养条件2.2.1培养基通用培养基（1L）60%海水蛋白胨：2g葡萄糖：10g酵母菌：1g（pH:7.5)#2培养基（人工海水1000mL）牛肉膏：4g酵母粉：1g蛋白胨：4g葡萄糖：10gNacl:2.5g(pH:7.0)LB培养基（1L）胰蛋白胨：10g酵母提取物：5g氯化钠：10g（pH7.4)注意：固体培养基中加15g琼脂MM培养基（1L）KH2PO4g(NH4)2SO42.0gMgSO4.7H2o0.16gFeSO4.7H2O0.05gCacl2.2H2o0.

8、011gMncl2.4H2o0.002g182.2.