TMT标记定量蛋白质组学.doc

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1、TMT标记定量蛋白质组学一、技术概述TMT™（TandemMassTag™）技术是由美国ThermoScientific公司研发的一种多肽体外标记技术。该技术采用10种同位素的标签，标记多肽的氨基基团，经过LC-MS/MS分析，可同时比较10组不同样品中蛋白质的相对含量。TMT技术是常用的差异蛋白质组学技术，在疾病标记物筛选、药物作用靶点、动植物抗病/抗胁迫机制、动植物发育分化机理等领域都有广泛应用。二、技术原理TMT试剂由三部分组成：质量报告基团、质量标准化基团和氨基反应基团。质量报告基团有10种不同的分子量，质量标准化基团也10有种不同的分

2、子量，与不同的报告基团搭配，能保证被标记的不同来源的同一肽段在一级质谱中具有相同的质荷比；氨基反应基团能与肽段N端及赖氨酸侧链氨基发生共价连接使肽段连上标记。一级质谱中，任何一种TMT试剂标记的不同样品中的同一肽段表现出相同的质荷比；二级质谱中，可切割键（箭头所指）断裂释放出TMT报告离子，在质谱低质量区产生了10个TMT报告离子峰，其强度反应了该肽段在不同样品中的相对表达量信息，另外二级质谱中的肽段碎片离子峰质荷比反应了该肽段的序列信息；这些质谱原始数据经过数据库检索，可得到蛋白质的定性和相对定量信息。三、技术优势1.灵敏度高：低丰度蛋白也能

3、检测出；2.适用范围广：几乎可对任何物种的各类蛋白质进行分离鉴定；3.高通量：能同时对10组样本中包含的蛋白进行鉴定及表达差异分析；4.高效：液相色谱与串联质谱连用，自动化操作，分析速度快，分离效果好。四、技术流程蛋白样本制备——胰酶酶解——TMT标记——肽段混合——LC-MS/MS检测——数据库检索——数据分析