Cas9 TALEN CRISPR条件性敲除小鼠的原理.doc

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1、条件性敲除小鼠的原理目前的条件性敲除小鼠主要是基于Cre-LoxP系统的。Cre-LoxP系统是源于P1噬菌体的一个DNA重组体系,由Cre酶和相应的LoxP位点组成,它能导致重组发生在特定的DNA序列处(LoxP位点),该系统可以将外源基因定点整合到染色体上或将特定DNA片段删除。传统的条件性敲除基于Cre-LoxP的基因打靶要分两步来进行。传统方法，首先要在胚胎干细胞的基因组中引入LoxP序列，这一步可以通过打靶载体的设计和对同源重组子的筛选来实现。第二步，通过Cre介导的重组来实现靶基因的遗传修饰或改变。在细胞水平上，可以用Cre重组酶表达质粒

2、转染中靶细胞，通过识别LoxP位点将抗性标记基因切除；在个体水平上将重组杂合子小鼠与Cre转基因小鼠杂交，筛选子代小鼠就可得到删除外源标记基因的条件性敲除小鼠。将Cre基因置于可诱导的启动子控制下，通过诱导表达Cre重组酶而将LoxP位点之间的基因切除（诱导性基因敲除），实现特定基因在特定时间或者组织中的失活。一般需要一年以上的时间，价格在15-20万不等。华夏凯奇基于Cas9系统的条件性敲除原理上和传统的条件性敲除类似，差别在于华夏凯奇利用OptimizedCas9/CRISPRSystem(OCAS)技术在基因组上加入loxp序列，可以快速获得L

3、oxp位点插入的小鼠。目前我们一般只需要4-5个月。价格也比传统方法大大降低。