A清除自由基实验方法.doc

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1、1、DPPH自由基清除实验取0.2mL样品，加入4mL醋酸缓冲溶液、3.8mL乙醇和2mLDPPH，混合均匀后室温避光放置30min，测定在517nm处的吸光度A。同理，取0.2mL样品、4mL醋酸缓冲溶液和3.8mL乙醇，测定在517nm处的吸光度Ab。4mL醋酸缓冲溶液、4mL乙醇和2mLDPPH，测定在517nm处的吸光度A0。自由基的清除率=[A0-(A－Ab)]/A0。2、ABTS自由基清除实验20mL的7mmol/LABTS和352μL的140nmol/L过硫酸钾混合，在室温、避光条件下静置过夜，形成ABTS＋自由基储备液。该储备液在室温、避光的条件下稳定，使用前用无水乙醇稀释成

2、工作液，要求其在30℃、734nm波长下的吸光度为0.7±0.02。加入的提取液0.1mL、ABTS工作液5mL，混合均匀后在室温下避光反应10min后，在734nm处测定吸光度At。ABTS溶液作空白吸光度为Ar，样品0.1mL、乙醇5mL混合均匀吸光度为A0。ABTS＋自由基清除率(%)＝[1-(At-A0)/Ar]×100式中：At为样品的吸光值；Ar为空白的吸光值。3、超氧阴离子清除实验采用邻苯三酚自氧化法，取4mL0.1mol/LpH8.2Tris-HCl缓冲溶液和蒸馏水2mL，混匀后在25℃水浴中保温20min，然后加入样品溶液2mL，取出后立即加入在25℃预热过的5mmol/L

3、邻苯三酚0.5mL(以10mmol/LHCL配制，空白管用10mmol/LHCL代替邻苯三酚的HCL溶液)，摇匀后倒入比色皿，325nm下每隔30s测定吸光度，连续测定4min，计算线性范围内每分钟吸光度的增加。在加入一定体积样品溶液时，减少蒸馏水的体积。抑制率(%)=(△A0-△A)/△A0×100式中：△A0为邻苯三酚的自氧化速率；△A为加入样品溶液后邻苯三酚的自氧化速率。