高效液相色谱仪使用过程中常见问题及其解决方法.pdf

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1、动物科学高效液相色谱仪使用过程中常见问题及其解决方法陈莲高洪肖啸（云南农业大学动物科学技术学院，云南昆明650201）高效液相色谱（highperformanceliquid1液相色谱仪系统色谱仪）之间。压力过高、过低及波动较大chromatography,HPLC）技术是近30年发液相色谱仪主要由贮液瓶、泵、进样都属于柱压问题，但柱压的高低与色谱柱展起来的一种具有高灵敏度、高选择性的器、色谱柱、柱温箱、检测器、数据处理系的种类、品牌、液相系统本身及使用的流高效快速分离分析技术。它既能用于微量统组成。对于整个系统而言，色谱柱、泵和动种类相关。值得注意的是

2、在使用梯度洗组分的分析测定，又能用于大量的制备分检测器是核心部件同时也是容易出事故脱进柱压的平稳缓慢的变化是允许的。离，手段灵活多样，其应用范围已超过其的主要部件。一般而言，柱压变化最先考虑的是它各种分离方法，尤其在生化医药样品的柱子，在排除柱子因素后再考虑其它因2常见问题及解决方法分析分离、食品卫生安全检验等方面更能素。在实际应用中常见柱压问题可从以2.1针对柱压问题充分发挥它的特长，为推动这些领域的进下几个方面来考虑（见表1）。柱压变化是使用高效液相色谱过程步和发展作出了巨大贡献。2.2针对保留时间漂移的问题中需要密切注意的指标，柱压的稳定与色液相色

3、谱在使用过程中常会出现一保留时间的改变是很多液相色谱仪谱图峰形的好坏、柱效高低、分离效果及些影响分析结果的小问题，如果使用人员使用者常碰到的问题，包括了保留时间的保留时间等密切相关。所谓柱压稳定并不了解了常见问题及其成因和相关解决方延长或缩短。它的产生与很多因素有关，是指压力值稳定于一个恒定值而是指压法，能做到早预防勤维护，使分析结果保可从以下方面进行考虑（见表2）。力波动范围在50PSI（针对Waters高效液相持较好的稳定性与较高的精确性。图1液相色谱仪工作系统及流程82005.05动物科学表1影响柱压稳定的原因及解决方法问题出现现象解决方法色谱柱被

4、堵塞柱压升高更换新的色谱柱。流速设定不正确柱压升高重新设定正确流量。流动相配比不正确柱压升高不同配比的流动相其粘度系数不相同，较高粘度的流动相相应的系统压力也大。如果可能，可考虑更换成粘度较小的溶剂或重新设定配比。系统压力零点飘移柱压升高调节压力传感器的零点。阻尼器堵塞柱压升高折下后进行超声波清洗或更换新的阻尼器。进样器堵塞柱压升高参见说明书进行清洗。管路或连接口堵塞柱压升高更换被堵塞管路或按说明书方法进行清洗。压力传感器故障柱压升高或降低或无柱压与供应商联系，进行维修。没有流动相流出柱压降低或为零检查储液瓶中有无流动相、沉子是否浸没在流动相中、泵是否运

5、行。系统存在漏液柱压降低检查各部件的连接点，进行再次固定。参比阀未关闭柱压降低或没有柱压将流速降低后关闭参比阀，一般降至0.1～0.2mL/min后关闭参比阀。系统管路中存在气泡柱压不稳定重新进行排气操作(可重复多次，直至气泡排出)。沉子表面的小孔被堵柱压在较大范围内波动将沉子取下后进行超声波清洗，可先用纯水再用甲醇进行清洗。表2保留时间漂移的问题及解决方法可能原因解决方法温度变化设定一个恒定的温度，而且当室温较所需温度低时要注意提高柱温的设定值。流量变化在正确使用流动相与流速的前提下检查泵是否存在问题，比如漏液与在线混合的准确性。流动相预混合避免在线混

6、合不均匀。流动相的问题使用预混合则要注意每次配液的准确性、精密度与pH值的变化；流动相被污染或加入添加剂后可能对待测组分存在干扰。色谱柱被污染正/反相冲洗色谱柱或更换新色谱柱。梯度滞后时间设置不正确检查泵和流路系统维护记录，确定系统最后使用之后有无调整。如果有变化，重新计算新的梯度滞后体积。色谱柱使用问题不同的色谱柱尺寸与填料对同一物质的保留时间是不同的，同一批样品最好使用同一色谱柱进行分析。系统不平衡应使用充足时间来平衡整个系统，特别在色谱柱第一次使用离子对试剂时，要有充足时间和流动相体积来平衡色谱柱。每次开机使用时平衡时间至少为0.5～1h，在改变流

7、动相时也需要0.5h来重新平衡柱子。2.3针对异常色谱峰问题<80％；最好是恒温、恒湿环境，远离高电4)避免泵内堵塞和进入气泡;异常的色谱峰指的是色谱图中无峰干扰、高振动设备。3.3进样器的保养或出现负峰、宽峰、双峰、肩峰、峰形不对3.2泵的保养每次分析结束后，要反复冲洗进样称等情况。具体情况与原因分析如表3。1)使用流动相尽量要清洁，流动相要器及进样针，防止样品交叉污染；3高效液相色谱仪的保养过滤后再用；3.4柱的保养2)进液处的沙芯过滤头要经常清洗；1)柱子在任何情况下不能碰撞、弯3.1HPLC的日常操作条件小型猪是当前医学研究的理想动物模型3)流动

8、相交换时要防止沉淀；曲或强烈震动；工作温度：10℃～30℃；相对湿度2005.0