凝血酶滴定法测定水蛭素活性步骤.doc

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1、凝血酶滴定法测定水蛭素活性步骤实验目的：凝血酶滴定法测定水蛭素活性含量实验仪器和试剂：电子天平酸度计离心机移液器45度试管架三羟甲基氨基甲烷（Tris）盐酸（Hcl）生理盐水蒸馏水凝血酶纤维蛋白原及常用玻璃仪器实验步骤：1、称取1.21g三羟甲基氨基甲烷加蒸馏水充分溶解，定溶到50ml，浓度为0.2mol/L。2、用移液器取429ul盐酸加蒸馏水充分溶解，定溶到50ml，浓度为0.1ml/L。3、从1去25ml，从2取40ml混合调PH到7.4（用1或2调），加蒸馏水定溶到100ml。4、称取样品1g放入试管加生理盐水5

2、ml充分溶解30分钟。5、把4放入离心机离心10分钟，4000转/分。6、取3（Tris缓冲液）1.6ml，稀释纤维蛋白原0.008g，浓度0.5%。7、用生理盐水配制40u/ml的凝血酶溶液。8、从5取上清液100ul。9、从6取200ul加入8充分摇匀后，吹一小气泡。10、从7每分钟取5ul加入9迅速摇匀后，匀速转动试管，观察反应，溶液上的小气泡随液面转动时视为反应的终点（记录好滴加凝血酶的次数）。11、计算公式为：其中C1=凝血酶的浓度C2=样品的浓度V1=滴加凝血酶的体积V2=取样的体积注：1、滴加次数超过5次还

3、不凝固的，应按一定倍数稀释样品。2、为了提高滴定的准确度可梯度配用不同浓度的凝血酶溶液。3、为了提高滴定的准确度同时也可在临近凝固的下一次滴加凝血酶5u/次，改为4u/次，3u/次，2u/次，1u/次。4、如果样品是溶液，直接取样100ul检测，检测步骤和计算方法不变。5、如果样品是可溶性粉状物，加溶液溶解后，取溶液100ul检测，检测步骤和计算方法不变。