半数致死量的测定.doc

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1、半数致死量的测定————————————————————————————————作者：————————————————————————————————日期：实验一半数致死量的测定半数致死量（LD50）是药物、毒物及病原微生物等毒力水平的一个标志。它表示能使全部实验对象死亡半数的剂量或浓度。 由于生物间存在个体差异性，因此LD50需用一批相当数量的实验对象进行实验方能测得，并且每种药物不同实验对象的LD50值不相同。测定LD50的方法很多，如目测机率单位法、直线回归法、累计法及序贯法等。由于寇氏法较常用， 并有计算简便，结果较准确等特点，故专门介绍

2、之。[目的]用寇氏法测定敌百虫对小白鼠的经腹腔注射的LD50和95％可信限。[方法]寇氏法（K?rbar氏法）[条件]1剂量必须按等比级数（剂量对数按等级数）分组。2各组动物数应相等。3“反应”应大致呈正态分布。最小剂量组的死亡率（Pn）应为0%，最大剂量组的死亡率（Pm）应为100%； 如果Pn<20%或Pm>80%需用校正公式计算；如Pn>20%或Pm<80%则不能用此法计算。[步骤]1预备实验（1）摸索上下限：即用少量动物逐步摸索出使全部动物死亡的最小剂量（Dm）和一个动物也不死亡的最大剂量（Dn）。 方法是据经验或文献定出一个估计量，观察

3、2~3只动物的死亡情况。如全死，则降低剂量；如全不死，则加大剂量再行摸索， 直到找出Pm=100%和Pn=0%的剂量，此两量分别为上下限。（2）确定组数，组距及各组剂量①组数：一般5～8组，可根据适宜的组距确定组数，如先确定5组，若组距过大，可再增加组数以缩小组距。 有时也可根据动物死亡情况来决定增减组数。②组距：指相邻两组剂量对数之差，常用“d”来表示。D不宜过大，因过大可使标准误增大；也不宜过小，因过小则组数增多， 各组间死亡率重叠造成实验动物的浪费。组距大小主要取决于实验动物对被试因素的敏感性。敏感性大者，死亡率随剂量增加（或减少） 而增加

4、（或减少）的幅度大，组距可小些；反之，敏感性小者，死亡率随剂量变化的幅度小，则组距应大些。上下限之间的距离可作为 敏感性大小的标志。距离大，说明敏感性小；距离小，则说明敏感性大。一般要求d应小于0.155，多在0.08～0.1之间。③确定组距方法：把上下限的剂量换算成对数值，设上限剂量的对数值为Xk，下限剂量的对数值为X1，组数为G，则：d＝（Xk-X1）/（G-1）④确定各组剂量：由X1逐次加d（或由Xk逐次减d），得出各组剂量的对数值，再分别查反对数， 即得出各组剂量（呈等比级数排列）。（3）配制等比药液，并使每只动物在给药容量上相等（如0.

5、5ml/20g）。⒉正式实验（1）实验动物的选择与分组①选择原则：可根据不同实验而选取动物，应选择对被试因素敏感的动物。同时也应考虑动物来源，经济价值及操作简便等条件。 LD50常用小白鼠进行实验来测得。②分组原则：每组动物数必须多于组数。因为每组动物数如少于组数，就不能充分反映各组死亡率的差别。（如共8组， 每组10只动物，高剂量三个组的死亡数分别为6、9、10，但如果每组只用6只动物，则高剂量三个组的死亡数可能都是6。）③分组方法：见附录，实验对象分组法。首先，按性别将动物雌雄分开或各半混合编组，然后按体重分群，再随机分组，为求使各组平均体重

6、相等。（2）给药、观察死亡数、求出死亡率①给药途径：可据不同药物及动物而定，小白鼠多用腹腔注射或灌胃法；也可静脉注射。②给药顺序：宜采取间隔跳组方法。如共7组，先按2、4、6组顺序给药，然后逆行按7、5、3、1组的顺序给药。 这样可避免药物放置过久或动物饥饿造成的偏向性误差。而且当第3组给药后，如第2组动物已经全死，则可省下第1组动物及 1号药液。如第7组已死亡，可补做第8组，争取做出0﹪死亡率的组来。每只动物的给药容量可按个体体重或平均体重确定。③观察时间：直到动物不再因药物作用而死亡为止。在观察期间应注意保证食、水、温度等生活条件，严防非被试

7、因素引起的死亡。最后将死亡情况及各种数据填入下表中。LD50计算表组别剂量对数剂量动物数死亡数死亡率P（P-1）（mg∕kg）XinrP(r∕n)∑3.计算公式①基本公式㏒LD50＝XK－d(∑P-0.5)式中：XK死亡率为100﹪组的对数剂量d对数组距∑P各组死亡率之和②校正公式当Pm>0.8或Pn<0.2时可用下公式计算3-Pm-Pn㏒LD50＝XK－d(∑P-─────)4③LD50＝㏒-1㏒LD50，单位应换算成mg∕kg或g∕kg表示。④95％可信限：LD50±4.5S㏒LD50.LD50S㏒LD50＝d√∑p（1-p）/（n-1）式中

8、：S㏒LD50㏒LD50的标准误P各组死亡率n每组动物数[测定LD50的原理及公式来源]为了解LD50测定原理，首先需了解剂量与反应的关