半数致死量测定.doc

《半数致死量测定.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、利多卡因半数致死量的测定时间：08-11-21授课教师：叶和杨目的：了解用小鼠测定药物的半数致死量的实验方法，掌握一些药理学实验基本技能，学会一种计算LD50的简单方法。原理：一、简单复习质反应、量反应、LD50、ED50、治疗指数的概念及意义：量反应：指效应可用连续数量值表示的反应，如血压、脉搏等。质反应：指效应用是通过计数（即数阳性反应的个数）而取得的，通常以百分率（％）来表示，如死亡。LD50在质反应是指药物引起半数实验动物死亡的剂量，是衡量药物的急性毒性大小的重要指标。ED50在质反应则是指引起半数实验动物产生阳性效应的剂量，是衡量药物

2、效应力强弱的重要指标。药物的治疗指数：LD50与ED50的比值称为药物的治疗指数（therapeuticindex,TI）。通常以此值表示药物安全性大小，但其又不能完全表示出药物安全性的差别。因此，安全性还应参考1％致死量（LD1）与95％有效量（ED95）之比值。二、介绍半数致死量：是指引起实验动物总体的半数死亡的药物剂量，是以动物死亡或存活作为质反应指标的。通常以mg/kg表示。半数致死量的测定是检定药物毒性的一种常用方法，在药理学和毒理学的研究中应用十分广泛。半数致死量的计算方法很多，本实验只介绍寇氏法。药物致死量（LethalDose简

3、称LD）有三种表示方法：最小致死量（MLD），半数致死量（LD50）和全致死量（LD100）。一般来说，一个药物的剂量与反应率之间有着一定的关系。50%LD50若以对数剂量作横坐标，发生反应的百分比为纵坐标作图，就可以得到一个以50%反应率处的点为对称的S形曲线。这是因为在一大群生物对象中，特别敏感或特别不敏感的总是占少数，而大多数的敏感情况总是比较接近的，形象地说它符合“两头小，中间大”的规律。由这种曲线可以看出，曲线两端比较平坦，灵敏度差，剂量不易确定，也就是说，MLD和LD100的误差是比较大的，而只有在LD50处曲线的斜率最大，灵敏度最

4、高，当剂量稍有变动时，反映率就发生明显的变化。因此，常用测定LD50来衡量药物的毒性。LD50数值越小，毒性越大。实验器材：鼠笼，天平，砝码，1ml注射器，利多卡因（药物浓度1%、1.18%、1.14%、1.68%、2%；苦味酸，计算器。实验方法：第一步：试验动物选择原则：1.种属因为小鼠繁殖力强，价廉易得，特别适用于需用大量动物的实验。2.年龄、体重低龄动物对药物敏感，只用于慢性和观察生长发育的实验。老龄动物代谢缓慢，生理功能低下，仅用于老龄医学的研究。一般药理实验均采用成年动物。动物年龄的大小与其体重大体一致，成年小鼠为18~28克，所以我

5、们选用体重为18~22克的活动正常，健康成年小鼠。3.性别不同性别动物对药物的敏感性有一定差异，雌鼠对药物的敏感性稍大于雄鼠。所以如无特殊要求，雌雄各半。实验前禁食12小时。第二步：探索剂量范围。根据前人经验及我们做的预实验，得知MLD为100mg/kg，LD100为200mg/kg第三步：均衡随机分组。每小组取50只小鼠，称重，标号，随机分为5组，为了避免各组的实验误差，应先将雌雄鼠分开，然后分别随机分到各组，保证每组动物中雌雄小鼠数量相同，体重相近。第四步：各组剂量计算。用寇氏法计算LD50，各剂量组要求按等比级数排列。经过预实验，得知最大

6、剂量也就是死亡率为100%的剂量为200mg/kg，最小剂量也就是死亡率为0%得剂量为100mg/kg，然后按照下列公式求出各组剂量间的比值，计算出各组剂量。第五步：给药观察和记录。在各实验组剂量确定以后，即可给药，给药后观察动物的一般情况，并记录动物死亡时的症状和死亡时间，按新药报批要求，一般需观察7天，因为学生实验时间有限，所以我们今天只观察2个小时。2小时后，统计各组死亡率（用小数表示）。第六步计算方法。经上述实验得出各组死亡率之后，按下列公式计算LD50及其标准误和可信限。LD50=log-1[Xm–i(∑P–0.5)]Xm；I；∑P；

7、LD50的可信限=LD50(P+0.95)=LD50±2.68LD50(P=0.99)由于整个半数致死量实验比较繁琐，所需时间比较长，所以今天同学们作实验只需从第三步做起，也就是在已知MLD和LD100的情况下，求LD50。做完实验后请同学们思考两道题。在做实验之前，介绍一下小鼠的捉拿、标记及腹腔注射的方法。小鼠牙长而尖锐，如果激怒它则容易被咬伤。所以捉拿时动作要轻缓，现用右手拎住小鼠尾巴放于粗糙面上，轻轻向后拉扯，再用左手的拇指及食指抓住其两耳之间及关颈部皮肤，然后将小鼠腹部上翻，用左手无名指和小指夹住尾巴使其固定。腹腔注射，左手将鼠固定，并

8、使其头低尾高，右手持注射器将针头穿过腹壁肌肉注入腹腔，有落空感为准，注入药物之前先回抽一下，如感到有负压，没有血液则可给药。标记用黄色苦味酸涂于毛上标