实验五 细胞基因组DNA的制备及其浓度的测定.doc

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1、实验五细胞基因组DNA的制备及其浓度的测定细胞/细菌/酵母基因组DNA小量提取试剂盒上海莱枫生物科技有限公司（LifeFeng）教室准备：1．每间教室各10份（共30份）BufferCS150μlBufferCL300μl蛋白酶K5μl无水乙醇250μlDNA吸附柱-C301只收集管3只BufferWAG500μlBufferWB11000μlTBS（pH7.4）11mlTE（pH8.0）50μl0.3ml抽提缓冲液2.5ml胰RNase（10mg/ml）5μl蛋白酶K（20mg/ml）15μlTris•Cl平衡酚（

2、pH8.0）3ml平衡酚/氯仿（等体积混匀）6ml无水乙醇7ml70％乙醇1.5mlddH2O100500μl20、100、1000ml加样枪*320、100、1000mlTip枪头*2一次性手套*2胶头*2洗耳球*1镊子*1卷纸*1废液盆*1废物桶*1饭盒：15ml塑料离心管*510ml移液管*7大口径滴管*5滴管*31.5mlEppendorf管*22．每间教室各1份（共2份）低温15ml离心机*1低温1.5ml离心机*137℃水浴锅（内有15ml离心管架*20孔）5070℃水浴锅（内有15ml离心管架*20孔）

3、讲台上：饭盒（内含15ml塑料离心管、10ml移液管、大口径滴管、滴管、1.5mlEppendorf管*若干备用）10、20、100、1000ml加样枪*410、20、100、1000mlTip枪头*3ddH2O（与分装时用的为同一瓶）*1瓶TBSTE抽提缓冲液胰RNase（10mg/ml）蛋白酶K（20mg/ml）Tris•Cl平衡酚（pH8.0）平衡酚/氯仿（等体积混匀）无水乙醇70％乙醇911室准备：第二周用1cm光径、500μl/1000μl石英比色杯*8ddH2O洗瓶*175％酒精洗瓶*1紫外分光光度计*1

4、ddH2O（与分装时用的为同一瓶）*1瓶废液盆*1卷纸*11.5mlEppendorf管*35备注：周二（4.20）基础医学班共10组，需HL60细胞11瓶周五（4.23）硕士班共20组，需HL60细胞21瓶试剂配制：1．TBS（Tris缓冲盐溶液）：NaCl8gKCl0.2g溶于800mlddH2O，用HCl调pH值至7.4，加ddH2O定容至1L，Tris碱3g分装后15磅20分钟高压灭菌，室温保存。2．TE（pH8.0）：10mMTris·Cl（pH8.0）；1mMEDTA（pH8.0）1MTris（pH8.0

5、）10ml0.5MEDTA（pH8.0）2ml加ddH2O至1L。3．抽提缓冲液（不含胰RNA酶）：10mMTris·Cl（pH8.0）；0.1MEDTA（pH8.0）；0.5％SDS1MTris（pH8.0）1ml0.5MEDTA（pH8.0）20ml加ddH2O至100ml。10％SDS5ml4．1×TAE：0.04MTris-乙酸；0.001MEDTA50×TAE20mL，加水定容至1L5．1MTris（pH8.0）：121.1gTris碱溶于800mlddH2O中，加入浓HCl42ml调节pH值至8.0，溶液

6、冷至室温后方可最后调定pH值，加ddH2O定容至1L，分装后高压灭菌。6．0.5MEDTA（pH8.0）：186.1gEDTA-2Na·2H2O加入800mlddH2O中，磁力搅拌器剧烈搅拌，用NaOH（约需20g）调节溶液的pH值至8.0，加ddH2O定容至1L，分装后高压灭菌。7．10％SDS：10g电泳级SDS溶于90mlddH2O中，加热至68℃助溶，加入几滴浓HCl调节溶液的pH值至7.2，加ddH2O定容至100ml，备用。8．50×TAE：242gTris碱57.1ml冰乙酸加ddH2O定容至1L。10

7、0ml0.5MEDTA（pH8.0）