乳与乳制品常规理化指标检验蛋白质含量的检测.doc

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1、乳与乳制品常规理化指标检验蛋白质含量的检测YLNB2.8一、凯氏定氮仪常量检测法1.原理样品中加入催化剂和浓硫酸，经加热后硫酸分解成亚硫酸酐、水和氧。有机物被氧化为二氧化碳和水，而蛋白质的氨态氮与过量的硫酸反应转变为硫酸铵，硫酸铵在碱性溶液中进行蒸馏。将蒸馏出来的氨用硼酸吸收，再用酸标准溶液滴定，根据酸标准溶液的用量和浓度计算出蛋白质含量。2.试剂所有试剂，如未注明规格，均指分析纯；实验用水，如未注明其他要求，均指三级水。2.1浓硫酸2.2硫酸钾2.3硫酸铜2.4氢氧化钠溶液：400g/L2.5硼酸溶

2、液：30g/L2.6甲基红—溴甲酚绿混合指示剂：用体积分数为95％的乙醇，将溴甲酚绿及甲基红分别配成1g/L的乙醇溶液，使用时按1g/L溴甲酚绿：1g/L甲基红为5：1的比例混合。2.7硫酸标准溶液：c(H+)=0.1000±0.005mol/L2.7.1标准溶液的配制：取3ml浓硫酸加到15ml水中，冷却后洗入1000ml容量瓶中，定容。2.7.2标准溶液的标定：（见GB/T601-2002）2.73硫酸铵：干燥后最低含量99.9%，使用前直接将硫酸铵在102±2℃干燥至少2h，在干燥器中冷却至室温

3、。2.仪器及器材3.1凯氏定氮仪，包括消化炉、废气排放装置、蒸馏单元及电位滴定仪3.2消化管，适用于凯氏定氮仪（3.1）3.3接收瓶：300ml三角瓶或烧杯3.方法4.1样品称取4.1.1原料奶和纯牛奶样品：称取约5g4.1.2乳饮料：称取约8g4.1.3冰淇淋：称取约5g4.1.4乳粉：称取约0.5g4.2测量4.2.1消化4.2.1.1将上述样品称入消化管中，同时称取5g硫酸钾，0.5g硫酸铜，然后加入15-20ml浓硫酸，将消化管放入消化炉中，将温度旋钮设定在大约6档左右，连接好排气装置并打开开

4、关，开始进行消化，消化30分钟或直到白烟消失后，将消化炉旋钮调节至9档，继续消化直到消化液透明。4.2.1.2消化至呈透明的蓝绿色后，继续消化至少1小时。在此过程中消化液必须沸腾。注：决定一个精确的沸腾时间必须根据在一个特定的实验室用仪器测量一个特定得样品所得到大量数据，一般选择一个高蛋白，高脂肪的牛奶样品，在透明后用不同的沸腾时间（1-1.5h）测定它的蛋白含量。蛋白平均含量随沸腾时间增加而增加，逐渐趋于恒定，然后当沸腾时间更长含量反而降低。选定能得到最大蛋白质的沸腾时间。4.2.1.3消化结束后，

5、消化液应是透明的。将消化管连同排气盖从消化器上移走，冷却到室温，冷却的消化液应是液体或在管底有少量的结晶体的液体。注：大量的结晶体可能是消化过程中酸损失的结果，它能导致检测结果偏低。为了减少酸的损失，可降低烟吸出的速度。4.2.1.4消化液冷却至室温后，移走排气盖，在每个管中慢慢加约20ml水，摇动呈旋涡状使其充分混合，保证分离出的结晶体全部溶解，再冷却到室温。4.2.2蒸馏把装有消化液的消化管放到蒸馏单元中，在冷凝器出口的下面放置一个接收瓶，还要把连接管放到接收瓶底端，编辑蒸馏程序，设定硼酸50ml

6、，氢氧化钠65ml，蒸馏时间3—5min。注：蒸馏时间是根据接收液的体积达到200ml而得到的。4.2.3滴定4.2.3.1用pH为7.00和4.00的缓冲溶液校准电位滴定仪。4.2.3.2设定电位滴定仪的滴定和结果计算程序，将滴定终点设为4.60，并开始滴定。4.2.3.3记录结果。4.3空白试验按照4.2.1—4.2.3所写的步骤进行空白试验，在消化管中加入0.85g蔗糖，加入蔗糖的作用是使空白在消化过程中与样品消耗等量的硫酸。4.4回收试验4.4.1方法的准确性应定期通过下面的回收试验进行检查，

7、按照4.1.1—4.1.3的步骤进行。4.4.2用0.12g硫酸铵加0.85g蔗糖进行测定。回收率应大于99％。4.4.3用0.18g色氨酸或0.16g盐酸赖氨酸（5.9）加0.67g蔗糖进行测定。回收率应大于98％。4.4.4在以上的两个回收试验中（4.4.2和4.4.3），低结果将说明过程失败和（或）硫酸标准溶液的浓度不准确。应检查凯氏定氮仪或重新标定硫酸标准溶液。5.结果计算5.1氮含量的计算样品中氮含量（g/100g）=其中：V——测定中消耗盐酸标准容液的体积，ml。V0——空白试验中消耗盐酸

8、标准容液的体积，ml。c(H+)——硫酸标准溶液H+的摩尔浓度，mol/L。m——样品质量，g。四舍六入的结果保留到0.01%。5.2蛋白质含量的计算蛋白含量的计算，用质量百分数表达，用氮含量乘以6.38即可。5.3回收率的计算用氮含量除以硫酸铵的理论氮含量21.19％即可。6.允许差同一样品的两次测定值之差不得超过平均值的1.5％。二、半微量凯氏定氮法1.原理样品中加入催化剂和浓硫酸，经加热后硫酸分解成亚硫酸酐、水和氧。有机物被氧化为二氧化碳和水，而蛋