SOP-QC-增补本药典-沉降菌及表面微生物测试标准操作规程.doc

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1、.............................................................制药厂GMP操作文件名称沉降菌及表面微生物测试标准操作规程第1页共3页附件0个编号颁发部门制定人审核人批准人制定日期审核日期批准日期分发至生效日期目的：建立正确的洁净实验室、洁净厂房沉降菌表面微生物测试标准操作规程，保证药品在规定洁净级别内进行。范围：要求有净化级别的实验室、厂房责任人：QA洁净度检测人员、微生物检验人员对本制度的实施负责。依据：《医药工业洁净室和洁净区中沉降菌的测试方法》，《药品生产质量管理规范》（2010年修订）内容：1仪器：微波炉、生化培

2、养箱、电冰箱、净化工作台。2用具：培养皿、无菌触碟、消毒棉棒，应在实验前经灭菌后备用。3培养基：胰酪胨大豆琼脂培养基、PH7.04培养皿的制备：将培养皿在121℃湿热灭菌30分钟。配制培养基并灭菌，将灭菌培养基加热熔化，冷至45～60℃，在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每皿15~20ml，待培养基凝固后，将培养基平皿倒置于30～35℃恒温培养箱中培养48小时，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用。5测试方法及步骤5.1采样前洁净区的状态：5.1.1沉降菌测试前：被测试洁净室（区）的温湿度须达到（18℃~26℃）相对湿度在（45%~65%）为宜；压差必须控制在规定值内。5.

3、1.2测试状态有静态和动态两种，并在报告中注明测试状态。静态测试时，室内测试人员不得多于2人。被测试洁净室（区）已消毒。测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。测试报告中应标明测试时所采用的状态和室内测试人员数。5.1.3在空态或静态a（无生产人员）测试时，对单向流洁净室而言，测试宜在净化空气调节系统正常运行时间不少于10min后开始，对非单向流洁净室，测试应在净化空调系统正常运行不少于30分钟开始。在静态b测试时（生产结束人员撤离），对单向流洁净室而言，测试应在生产操作人员撤离现场并经过10min自净后开始，对非单向流洁净室，测试应在生产操作人员撤离现场并经过20min自净

4、后开始。5.1.4在动态测试时，则须记录生产开始的时间以及测试时间。5.2采样点数量及其布置5.2.1采样点的确定：根据洁净区（室）面积大小确定最少采样点数目（根据国家标准GB/T16294-2010要求），在满足最少采样点数目的同时，还宜同时满足最少培养皿数。采样点的布置应力求均匀，避免在某局部区域过于集中，培养皿应布置在有代表性的地方（如关键设备或易受污染的地方）和气流扰动最小的地方。工作区测试点位置离地0.8～1.5m左右（略高于工作面），可在关键设备或关键工作活动范围处增加测点。5.2.2最少采样点数目在满足最少采样点数目的同时，还宜满足最少培养皿数。面积m²洁净度级别微

5、生物最大沉降菌数沉降菌个/皿最少采样点数最少培养皿数＜10A级＜12~314≥20~＜40C级5022≥40~＜100D级10022≥100~＜200D级10032≥200~＜400D级10062≥400~＜1000D级100132≥1000~＜2000D级100322≥2000D级100632ф90mm，CFU/4h(培养皿暴露时间不超过4小时，以平均菌落数表示)（1）A级洁净区采样点分布图（15点）（2）C、D级洁净区采样点分布图示意5.3采样方法：5.3.1沉降菌：将已制备好的培养皿放置在预先确定的取样点，打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5小时（静态），4小时（动态），再

6、将培养皿盖上盖后倒置。5.3.2表面微生物：5.3.2.1无菌碟法：用无菌触碟(Φ50mm)直接接触所检物体或工作服5~10秒，再将培养皿盖上盖后倒置。5.3.2.2棉签擦拭法：无菌棉签支擦拭物体表面25cm2然后用消毒医用剪子将棉头放入100mlPH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液中，振摇至均匀。按细菌检查法注皿。5.4培养全部采样结束，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。采用大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）配制的培养皿经采样后，在30-35℃培养，时间不少于2天。培养基应有对照试验，检查培养基本身是否污染。5.5菌落计数：4.6.1达到规定的培养时间后，菌落数用肉眼直接计数、标记或在

7、菌落计数器上点计，并用5~10倍放大镜检查，有否遗漏。4.6.2将测得的数据进行计算，计算公式如下平均菌落数M=（M1+M2+…+Mn）/n式中：M1=1号培养皿菌落数M2=2号培养皿菌落数Mn=n号培养皿菌落数n=培养皿总数6注意事项6.1采取一切措施防止人为对样本的污染。6.2由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或者正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。6.3采样前应仔细检查每个培养皿的质量